Гистохимия: методы Гистохимические методы: введение Буферные растворы и их приготовление Выявление нуклеиновых кислот Выявление (суммарное) белков Гистохимические методы для полисахаридов и протеидов Окрашивание жиров и липидов Металлы, анионы, экзогенные пигменты Гистохимия ферментов Гистохимия нервной системы
Буферные растворы и их приготовление
Различные ферменты требуют для проявления своей активности разные значения рН.
Так, оптимальное условие для действия щелочной фосфатазы при рН 9,0, тогда как для кислой фосфатазы требуется рН 5,0.
Чтобы обеспечить наилучшие условия для проявления активности гистохимически выявляемого фермента, необходимо, чтобы в среде инкубации поддерживалось значение рН, оптимальное для данного фермента. Это условие достигается введением в среду инкубации буферных смесей с заданными значениями рН. Наиболее распространенными буферными растворами являются фосфатный, ацетатный и трис-буфер.
Приготовление буферных растворов
Прежде чем дать прописи буферных смесей, необходимо напомнить, что для определения концентрации растворов реактивов приняты понятия молярность (М) и нормальность (N).
Молярность раствора (М) — количество грамм-молей вещества, содержащихся в 1 л раствора. Грамм-моль — молекулярная масса данного вещества, выраженная в граммах. Например, для приготовления раствора в концентрации 0,2 М необходимо на 1 л раствора взять вещество в количестве, равном 0,2 его молекулярной массы.
Нормальность (N) — количество грамм-эквивалентов в 1 л раствора.
Грамм-экивалент — количество данного вещества, химически равноценное в данной реакции 1 грамм-атому водорода.
Эоснования = Моснования / число замещаемых в реакции гидроксильных групп
Экислоты = Мкислоты / число замещаемых в реакции атомов водорода
Эсоли = Мсоли / произведение числа катионов на его заряд
Э H2SO4 = М H2SO4 / 2 = 98 / 2 = 49 г
Э Ca(OH)2 = М Ca(OH)2 / 2 = 74 / 2 = 37 г
Э Al2(SO4)3 = М Al2(SO4)3 / (2· 3) = 342 / 2= 57 г
Фосфатный буфер (рН 6,0—8,0).
А — 0,2 М КН2 РО4 (13,6 г соли в 1 л дистиллированной воды);
Для получения 100 мл буфера нужного рН следует слить растворы Аи Б в количествах, указанных в табл. 1.
Фосфатный буфер (PBS): обоснование, приготовление и использование
Содержание:
В фосфатный буфер, BPS или фосфатный буферный растворпредставляет собой буферный и изотонический раствор, функция которого заключается в поддержании pH и осмотического давления, максимально приближенных к естественной биологической среде (физиологическому). Аббревиатура PBS означает физиологический раствор с фосфатным буфером.
Между тем, контроль осмолярности очень важен, особенно при работе с живыми клетками, поскольку плазматические мембраны клеток реагируют в соответствии с концентрацией растворенных веществ, в которых они находятся.
Если клетки переносятся в гипертоническую среду, они становятся обезвоженными, поскольку водный градиент переносится в сторону, где концентрация растворенных веществ выше. Если, с другой стороны, клетки помещают в гипотоническую среду, клетки будут поглощать жидкость до тех пор, пока они не будут лизированы.
Вот почему буфер PBS используется для лабораторных протоколов, требующих обслуживания клеток. in vitro, таким образом клетки не будут повреждены.
PBS состоит из комбинации солей, таких как хлорид натрия, фосфат натрия, хлорид калия и фосфат калия. Состав PBS может варьироваться в зависимости от протокола.
Основа
В основном функция фосфатного буфера заключается в поддержании постоянного физиологического pH вместе с концентрацией электролита, аналогичной той, которая обнаруживается внутри тела.
В этой среде клетки могут оставаться стабильными, так как физиологические условия максимально имитируются.
При необходимости к исходному составу PBS могут быть добавлены другие соединения, например добавление EDTA к буферу полезно для промывания эритроцитов в тесте на перекрестную несовместимость.
EDTA предотвращает расщепление и лизирование фракции комплемента C1, присутствующей в сыворотке, в эритроциты, то есть позволяет избежать ложных результатов несовместимости. Кроме того, ЭДТА помогает диссоциировать клетки.
Подготовка
Количество солей, которое необходимо взвесить для приготовления физиологического раствора с фосфатным буфером, будет зависеть от количества, которое необходимо приготовить:
-Фосфатно-солевой буферный раствор (10X PBS)
На один литр раствора:
Техника подготовки
Поместите тяжелые соли в стакан, добавьте достаточное количество воды (80%) и перемешайте на перемешивающей пластине с помощью магнитной планки, пока соли не растворятся.
Фильтр для удаления нерастворенных частиц. Используйте фильтры с размером пор 0,45 мкм. Автоклав и асептическое распределение в колпаке с ламинарным потоком в стеклянных банках с крышками.
10-кратный раствор (концентрированный) не регулирует pH. Регулировку проводят после разбавления до концентрации буфера 1X PBS (разведение 1:10).
-Буферный фосфатный солевой раствор (1X PBS)
1X PBS можно приготовить непосредственно, взвесив соответствующее количество каждой соли, или его можно приготовить путем разбавления исходного раствора (1:10) стерильной дистиллированной водой.
-Чтобы приготовить один литр физиологического раствора с фосфатным буфером 1X PBS, взвесьте:
Техника подготовки
Действуйте, как описано в концентрированном растворе. Впоследствии необходимо отрегулировать pH. Для этого измерьте pH и, в зависимости от результата, используйте кислоту (HCl) или основание (NaOH), чтобы понизить или повысить pH, соответственно, до 7,4.
Кислота или основание добавляются по каплям, а значение pH раствора контролируется с помощью pH-метра. Отфильтруйте, автоклавируйте и асептически разложите по коническим пробиркам или сосудам по мере необходимости.
-Чтобы приготовить 1X PBS из 10X исходного раствора:
Сделайте раствор 1:10. Например, чтобы приготовить 1 литр 1X PBS, отмерьте 100 мл исходного раствора и добавьте 700 мл стерильной дистиллированной воды. Отрегулируйте pH и залейте количество воды до 1000 мл.
Приготовленный буфер PBS бесцветный и прозрачный.
Растворы для регулирования pH
HCl
На 100 мл 1 молярной HCl (соляной кислоты).
Отмерьте 91 мл дистиллированной воды и поместите его в стакан на 250 мл.
Отмерьте 8,62 мл концентрированной HCl и медленно добавьте ее в стакан с водой (никогда не делайте наоборот). При работе с сильными кислотами (высококоррозионными веществами) примите соответствующие меры биологической безопасности.
Перемешивайте в течение 5 минут, предпочтительно используя пластину для перемешивания с магнитной полосой внутри стакана. Перенести в баллон 100 мл и довести до 100 мл с помощью H2Или дистиллированный.
NaOH
На 100 мл NaOH (гидроксид натрия) 10 моль.
Отмерьте 40 мл дистиллированной воды и поместите ее в стакан на 250 мл. Отмерьте 40 г NaOH и добавьте в воду. Перемешайте, используя пластину для перемешивания с магнитной полосой внутри стакана.
Перенести в мерную колбу на 100 мл и долить до метки дистиллированной водой. Соблюдайте правила биобезопасности, поскольку эта реакция является экзотермической (она выделяет энергию в виде тепла).
Если вы хотите приготовить другое количество фосфатно-солевого раствора, вы можете обратиться к следующей таблице:
Приложения
Он в основном используется в клеточной биологии, иммунологии, иммуногистохимии, бактериологии, вирусологии и исследовательских лабораториях.
Он идеально подходит для промывки клеток центрифугами (эритроцитов), промывки монослоев клеток, методов спектроскопической эллипсометрии, количественного определения бактериальных биопленок, поддержания культур клеток на вирусы, в качестве промывочного раствора в методе непрямой иммунофлуоресценции. и в методах характеристики моноклональных антител.
Он также служит для транспортировки клеток или тканей, в качестве разбавителя для подсчета клеток, приготовления клеточных ферментов (трипсина), в качестве разбавителя для метода осушения биомолекул и для приготовления других реагентов.
С другой стороны, Мартин и др. В 2006 году продемонстрировали, что PBS можно использовать в лабораториях судебной экспертизы, в частности, при извлечении сперматозоидов из вагинальных мазков или вагинальных клеток из мазков полового члена. Таким образом можно установить, были ли сексуальные отношения.
Ограничения
-Некоторые буферы PBS содержат в качестве консерванта вещество, называемое азидом натрия. Это соединение может образовывать взрывчатые вещества при контакте со свинцом или медью. По этой причине следует соблюдать особую осторожность при сливе этого реагента в канализацию. Если его выбрасывают таким образом, необходимо добавить много воды, чтобы максимально разбавить его.
-Цинк не следует добавлять в фосфатный буфер, так как он вызывает выпадение в осадок некоторых солей.
-Ванген и его коллеги в 2018 году определили, что использование PBS не подходит для отмывки первичных клеток острого миелоидного лейкоза (AML), выделенных из периферической крови, из-за того, что многие клетки теряются в результате лизиса, с большим уменьшением количества материала. белок.
Поэтому они определили, что первичные клетки AML не следует мыть PBS после хранения в жидком азоте.
Ссылки
Головокружение: типы, наиболее частые причины, симптомы и лечение
Буферные растворы и уравнение Гендерсона-Гассельбаха (Декабрь 2021).
PBS (забуференный фосфатом физиологический раствор) является обычно используемым буфером для иммуногистохимического окрашивания и обычно используется в биологических исследованиях. Концентрация осмолярности и ионов растворов соответствует концентрации человеческого тела (изотонической).
PBS представляет собой раствор на водной основе, содержащий гидрофосфат натрия, хлорид натрия и, в некоторых случаях, хлорид калия и дигидрофосфат калия.
Иммунофлуоресцентное окрашивание для IHC
Иммунофлуоресцентное окрашивание было первым методом иммуногистохимического (IHC) окрашивания. С основанием реакции связывания антиген-антитело антигены становятся видимыми с использованием флуоресцентных красителей при конъюгировании с антителами. Процесс происходит, когда активируется возбуждающим светом определенной длины волны под флуоресцентным микроскопом. Иммуногистохимия относится к процессу обнаружения антигенов (например, белков) в клетках тканевой секции с использованием принципа антител, специфически связывающихся с антигенами в биологических тканях.
Использование забуференного фосфатом солевого раствора (PBS)
Забуференный фосфатом физиологический раствор имеет много применений, поскольку он изотоничен и не токсичен для большинства клеток. Его можно использовать для разбавления веществ и используется для промывания контейнеров, содержащих клетки. PBS можно использовать в качестве разбавителя в методах сушки биомолекул, поскольку молекулы воды внутри него будут структурированы вокруг вещества (например, белка), чтобы его «высушивали» и иммобилизовали до твердой поверхности.
Тонкая пленка воды, которая связывается с веществом, предотвращает денатурацию или другие конформационные изменения. Карбонатные буферы могут использоваться с той же целью, но с меньшей эффективностью. PBS также может использоваться для получения эталонного спектра при измерении адсорбции белка в эллипсометрии.
Приготовление PBS
Существует много разных способов приготовления PBS.
Некоторые формулы не содержат калия, в то время как другие содержат кальций или магний. Рецепт буфера ниже, который относительно прост, для 10X исходного раствора PBS (0,1 М). Также предоставляется возможность добавления Tween. Весь процесс занимает около 10 минут.
Как сделать фосфатный буферный солевой раствор (PBS)
Советы по созданию буфера PBS
Что вам нужно для создания буфера PBS
Кирпич и раствор: что это значит, почему мы заботимся?
У банков кирпичей и минометов есть филиалы, которые клиенты могут посетить (и у них также могут быть веб-сайты). См. Плюсы и минусы банковских операций с кирпичами и минометами.
10 Шагов, которые вам нужно сделать, чтобы сделать отличное ТВ-объявление
Инвестирование в телевизионную рекламу намного больше экономичный, чем вы думаете. Ниже приведены шаги, которые вы можете выполнить, чтобы получить свое объявление в прямом эфире.
Как выбрать правильный раствор раствора: N, M, S или O
Успешное выполнение многих фармакопейных испытаний и методик количественного и качественного анализа требует регулирования или поддержания на определённом уровне величины рН с помощью буферных растворов.
Буферные растворы – растворы с определённой концентрацией водородных ионов (pH), содержащие сопряжённую кислотно-основную пару, обеспечивающую устойчивость величины их водородного показателя при незначительном изменении концентрации, либо при добавлении небольшого количества кислоты или основания.
Забуференные растворы ‒ это системы, в которых конкретный ион находится в равновесии с веществами, способными связывать или высвобождать этот ион. Забуференные растворы способны сохранять активность определенного иона при добавлении веществ, которые, как ожидается, могут изменять активность этого иона.
В фармакопейном анализе применяют кислотные буферные системы (раствор слабой кислоты и ее соли) и основные буферные системы (раствор слабого основания и его соли). рН таких смесей мало меняется при разбавлении в довольно широких пределах (1:100), а также при добавлении небольших количеств сильных кислот или оснований.
Буферный раствор характеризуется значением создаваемого рН и буферной емкостью. Буферная емкость системы определяется количеством моль кислоты или основания (в грамм-эквивалентах на 1 л), добавление которых изменяет рН 1 л (дм 3 ) буферного раствора на 1 единицу рН. Емкость буферного раствора регулируется концентрацией буферных веществ.
Буферные растворы используются для установления и поддержания активности иона в узком диапазоне рН.
Буферные растворы используются в основном:
Компоненты буферной системы для целей химического анализа должны сочетаться с определяемым веществом и используемыми реактивами. Буферные и забуференные растворы готовят на воде очищенной. Также можно использовать воду дистиллированную и воду для хроматографии. Буферные и забуференные растворы после приготовления следует тщательно перемешать.
Забуференный ацетоновый раствор
8,15 г натрия ацетата и 42,0 г натрия хлорида растворяют в воде, прибавляют 68,0 мл 0,1 М раствора хлористоводородной кислоты, 150 мл ацетона и доводят объём раствора водой до 500,0 мл.
Буферный раствор рН 2,0
6,57 г калия хлорида растворяют в воде, прибавляют 119,0 мл 0,1 М раствора хлористоводородной кислоты и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
Фосфатный буферный раствор рН 2,0
8,95 г динатрия гидрофосфата и 3,40 г калия дигидрофосфата растворяют в воде и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл. Доводят рН до 2,0 потенциометрически с помощью фосфорной кислоты концентрированной.
Сульфатный буферный раствор рН 2,0
132,1 г аммония сульфата растворяют в воде, доводят объём раствора водой до 500,0 мл (раствор I).
Осторожно при постоянном охлаждении и перемешивании прибавляют 14 мл серной кислоты концентрированной к 400,0 мл воды; охлаждают и доводят объём раствора водой до 500,0 мл (раствор II).
Смешивают равные объёмы растворов I и II; если необходимо, доводят рН до 2,0 потенциометрически раствором I или II.
Буферный раствор рН 2,5
100,0 г калия дигидрофосфата растворяют в 800 мл воды, доводят рН до 2,5 потенциометрически с помощью хлористоводородной кислоты концентрированной и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
Буферный раствор рН 2,5 (1)
4,9 г фосфорной кислоты разведённой 10 % смешивают с 250 мл воды, доводят рН до 2,5 потенциометрически с помощью раствора натрия гидроксида разведённого 8,5 % и доводят объём раствора водой до 500,0 мл.
Буферный раствор рН 3,0
21,0 г лимонной кислоты растворяют в 200,0 мл 1 М раствора натрия гидроксида и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
40,3 мл полученного раствора доводят 0,1 М раствором хлористоводородной кислоты до 100,0 мл.
0,25 М цитратный буферный раствор рН 3,0
4,8 г лимонной кислоты растворяют в 80,0 мл воды. Доводят рН до 3,0 потенциометрически с помощью 1 М раствора натрия гидроксида и доводят объём раствора водой до 100,0 мл.
0,1 М фосфатный буферный раствор рН 3,0
12,0 г натрия дигидрофосфата безводного растворяют в воде. Доводят рН до 3,0 потенциометрически с помощью фосфорной кислоты разведённой 10 % и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
Фосфатный буферный раствор рН 3,0
0,7 мл фосфорной кислоты концентрированной смешивают с 100 мл воды и доводят объём раствора водой до 900,0 мл. Доводят рН до 3,0 с помощью раствора натрия гидроксида концентрированного и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
Фосфатный буферный раствор рН 3,0 (1)
3,40 г калия дигидрофосфата растворяют в 900 мл воды. Доводят рН до 3,0 потенциометрически с помощью фосфорной кислоты концентрированной и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
Фосфатный буферный раствор рН 3,2
900,0 мл 4 г/л раствора натрия дигидрофосфата смешивают с 100 мл 2,5 г/л раствора фосфорной кислоты концентрированной. Если необходимо, доводят рН до 3,2 потенциометрически раствором натрия дигидрофосфата или фосфорной кислоты концентрированной.
Фосфатный буферный раствор рН 3,2 (1)
Доводят рН до 3,2 потенциометрически для 35,8 г/л раствора динатрия гидрофосфата c помощью фосфорной кислоты разведённой 10 %.
100,0 мл полученного раствор доводят водой до объема 2000,0 мл.
Буферный раствор рН 3,5
25,0 г аммония ацетата растворяют в 25,0 мл воды, прибавляют 38,0 мл 25 % хлористоводородной кислоты. Если необходимо, доводят рН до 3,5 потенциометрически с помощью хлористоводородной кислоты разведённой 7,3 % или 10% раствора аммиака и доводят объём раствора водой до 100,0 мл.
Фосфатный буферный раствор рН 3,5
68,0 г калия дигидрофосфата растворяют в воде, доводят рН до 3,5 потенциометрически с помощью фосфорной кислоты концентрированной. Доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
Буферный раствор рН 3,6
250,0 мл 0,2 М раствора калия гидрофталата смешивают с 11,94 мл 0,2 М рас-твора хлористоводородной кислоты и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
Буферный раствор рН 3,7
15,0 мл уксусной кислоты разведенной 30 % смешивают с 60,0 мл спирта 96 % и 20,0 мл воды. Доводят рН до 3,7 потенциометрически с помощью раствора аммиака и доводят объём раствора водой до 100,0 мл.
Забуференный раствор меди сульфата рН 4,0
0,25 г меди (II) сульфата и 4,5 г аммония ацетата растворяют в уксусной кислоте разведённой 12 % и доводят объём раствора тем же растворителем до 100,0 мл.
Ацетатный буферный раствор рН 4,4
136,0 г натрия ацетата и 77,0 г аммония ацетата растворяют в воде и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл; прибавляют 250,0 мл уксусной кислоты ледяной и перемешивают.
Фталатный буферный раствор рН 4,4
2,042 г калия гидрофталата растворяют в 50,0 мл воды, прибавляют 7,5 мл 0,2 М раствора натрия гидроксида и доводят водой до объёма 200,0 мл.
0,05 М фосфатный буферный раствор рН 4,5
6,80 г калия дигидрофосфата растворяют в 1000,0 мл воды.
Ацетатный буферный раствор рН 4,5
77,1 г аммония ацетата растворяют в воде, прибавляют 70,0 мл уксусной кислоты ледяной и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
Натрия ацетатный буферный раствор рН 4,5
63,0 г натрия ацетата безводного растворяют в воде, прибавляют 90,0 мл уксусной кислоты разведенной 30 %. Доводят рН до 4,5 потенциометрически уксусной кислотой разведённой 30% и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
Ацетатный буферный раствор рН 4,6
5,4 г натрия ацетата растворяют в 50,0 мл воды, прибавляют 2,4 г уксусной кислоты ледяной и доводят объём раствора водой до 100,0 мл; если необходимо, доводят рН до 4,6 потенциометрически уксусной кислотой ледяной.
Сукцинатный буферный раствор рН 4,6
11,8 г янтарной кислоты растворяют в смеси 600,0 мл воды и 82,0 мл 1 М раствора натрия гидроксида и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
Ацетатный буферный раствор рН 4,7
136,1 г натрия ацетата растворяют в 500,0 мл воды. 250,0 мл полученного раствора смешивают с 250,0 мл уксусной кислоты разведённой 12 %. Встряхивают дважды со свежеприготовленным отфильтрованным 0,1 г/л раствором дитизона в хлороформе. Встряхивают с углерода тетрахлоридом до обесцвечивания экстракта. Водный слой фильтруют для удаления следов углерода тетрахлорида.
Ацетатный буферный раствор рН 5,0
К 120,0 мл 6,0 г/л раствора уксусной кислоты ледяной прибавляют 100,0 мл 0,1 М раствора калия гидроксида и 250,0 мл воды, перемешивают. Доводят рН до 5,0 потенциометрически с помощью 6 г/л раствора уксусной кислоты ледяной или 0,1 М раствора калия гидроксида и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
Цитратный буферный раствор рН 5,0
20,1 г лимонной кислоты и 8,0 г натрия гидроксида растворяют в воде и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл. Доводят рН до 5,0 потенциометрически с помощью хлористоводородной кислоты разведённой 7,3 %.
Фосфатный буферный раствор рН 5,0
2,72 г калия дигидрофосфата растворяют в 800,0 мл воды. Доводят рН до 5,0 потенциометрически с помощью 1 М раствора калия гидроксида и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
Буферный раствор рН 5,2
1,02 г калия гидрофталата растворяют в 30,0 мл 0,1 М раствора натрия гидроксида и доводят объём раствора водой до 100,0 мл.
0,067 М фосфатный буферный раствор рН 5,4
Смешивают необходимые объёмы 23,99 г/л раствора динатрия гидрофосфата и 9,12 г/л раствора натрия дигидрофосфата моногидрата, чтобы получить рН 5,4. Доводят рН до 5,4 потенциометрически.
Буферный раствор рН 5,5
54,4 г натрия ацетата растворяют в 50,0 мл воды, если необходимо, нагревают до температуры 35 С. После охлаждения полученного раствора к нему медленно приливают 10,0 мл уксусной кислоты безводной, перемешивают и доводят объём раствора водой до 100,0 мл.
Ацетатно-эдетатный буферный раствор рН 5,5
250,0 г аммония ацетата и 15,0 г натрия эдетата растворяют в 400,0 мл воды и прибавляют 125,0 мл уксусной кислоты ледяной.
Фосфатный буферный раствор рН 5,5
Раствор I. 13,61 г калия дигидрофосфата растворяют в воде и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
Раствор II. 35,81 г динатрия гидрофосфата растворяют в воде и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
Смешивают 96,4 мл раствора I и 3,6 мл раствора II.
1,19 г динатрия гидрофосфата дигидрата и 8,25 г калия дигидрофосфата растворяют в воде и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
Ацетатный буферный раствор рН 6,0
100,0 г аммония ацетата растворяют в 300,0 мл воды, приливают 4,1 мл уксусной кислоты ледяной. Если необходимо, доводят рН до 6,0 с помощью раствора аммиака или уксусной кислоты разведенной 30 % и доводят объём раствора водой до 500,0 мл.
Диэтиламмония фосфата буферный раствор рН 6,0
68,0 мл фосфорной кислоты концентрированной осторожно разбавляют водой до 500,0 мл. 25,0 мл полученного раствора смешивают с 450,0 мл воды и 6,0 мл диэтиламина. Если необходимо, доводят рН до (6 0,05) потенциометрически с помощью диэтиламина или кислоты фосфорной концентрированной и доводят объём раствора водой до 500,0 мл.
6,8 г натрия дигидрофосфата растворяют в воде и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл. Доводят рН до 6,0 потенциометрически с помощью раствора натрия гидроксида концентрированного.
Фосфатный буферный раствор рН 6,0 (2)
250,0 мл 0,2 М раствора калия дигидрофосфата смешивают с 28,5 мл 0,2 М раствора натрия гидроксида и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
Фосфатный буферный раствор рН 6,4
2,5 г динатрия гидрофосфата, 2,5 г натрия дигидрофосфата и 8,2 г натрия хлорида растворяют в 950,0 мл воды. Если необходимо, доводят рН до 6,4 потенциометрически с помощью 1 М раствора натрия гидроксида или 1 М раствора хлористоводородной кислоты и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
Фосфатный буферный раствор рН 6,4 (1)
1,79 г динатрия гидрофосфата, 1,36 г калия дигидрофосфата и 7,02 г натрия хлорида растворяют в воде и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
0,5 М фталатный буферный раствор рН 6,4
100,0 г калия гидрофталата растворяют в воде и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл. Доводят рН до 6,4 потенциометрически с помощью раствора натрия гидроксида концентрированного.
Буферный раствор рН 6,5
60,5 г динатрия гидрофосфата и 46,0 г калия дигидрофосфата растворяют в воде, прибавляют 100,0 мл 0,02 М раствора натрия эдетата, 20 мг ртути (II) хлорида и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
Фосфатный буферный раствор рН 6,5
2,75 г натрия дигидрофосфата и 4,5 г натрия хлорида растворяют в 500 мл воды. Доводят рН до 6,5 потенциометрически с помощью фосфатного буферного раствора рН 8,5.
0,1 М фосфатный буферный раствор рН 6,5
13,80 г натрия дигидрофосфата моногидрата растворяют в 900,0 мл воды. Доводят рН до 6,5 потенциометрически с помощью раствора натрия гидроксида концентрированного и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
Имидазольный буферный раствор рН 6,5
6,81 г имидазола, 1,23 г магния сульфата и 0,73 г кальция сульфата растворяют в 752 мл 0,1 М раствора хлористоводородной кислоты. Если необходимо, доводят рН до 6,5 потенциометрически 0,1 М раствором хлористоводородной кислоты и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
Фосфатный буферный раствор рН 6,6
250,0 мл 0,2 М раствора калия дигидрофосфата смешивают с 89,0 мл 0,2 М раствора натрия гидроксида и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
1,0 г калия дигидрофосфата, 2,0 г дикалия гидрофосфата и 8,5 г натрия хлорида растворяют в 900 мл воды. Если необходимо, доводят рН до 6,8 потенциометрически 0,1 М раствором хлористоводородной кислоты или 0,1 М раствором натрия гидроксида и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
51,0 мл 27,2 г/л раствора калия дигидрофосфата смешивают с 49,0 мл 71,6 г/л раствора динатрия гидрофосфата. Если необходимо, доводят рН до 6,8 потенциометрически исходным раствором калия дигидрофосфата или динатрия гидрофосфата.
Хранят при температуре от 2 до 8 ºС.
1 М трис-гидрохлорида буферный раствор рН 6,8
60,6 г трис(гидроксиметил)аминометана растворяют в 400 мл воды, доводят рН до 6,8 потенциометрически с помощью хлористоводородной кислоты концентрированной и доводят объём раствора водой до 500,0 мл.
Малеатный буферный раствор рН 7,0
10,0 г натрия хлорида, 6,06 г трис(гидроксиметил)аминометана и 4,90 г малеинового ангидрида растворяют в 900,0 мл воды. Доводят рН до 7,0 потенциометрически с помощью 170 г/л раствора натрия гидроксида и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
250,0 мл 0,2 М раствора калия дигидрофосфата смешивают со 148,2 мл 8 г/л раствора натрия гидроксида. Если необходимо, доводят рН до 7,0 потенциометрически исходным раствором калия дигидрофосфата или натрия гидроксида и доводят объём раствора водой до 1000,0мл.
Фосфатный буферный раствор рН 7,0 (2)
50,0 мл 136 г/л раствора калия дигидрофосфата смешивают с 29,5 мл 1 М раствора натрия гидроксида, доводят объём раствора водой до 100,0 мл. Доводят рН до 7,0 потенциометрически исходным раствором калия дигидрофосфата или натрия гидроксида.
Фосфатный буферный раствор рН 7,0 (3)
5,0 г калия дигидрофосфата и 11,0 г дикалия гидрофосфата растворяют в 900,0 мл воды. Доводят рН до 7,0 потенциометрически с помощью фосфорной кислоты разведённой 10 % или раствора натрия гидроксида разведённого 8,5 % и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
Фосфатный буферный раствор рН 7,0 (4)
28,4 г динатрия гидрофосфата безводного и 18,2 г калия дигидрофосфата растворяют в воде и доводят объём раствора водой до 500,0 мл.
Фосфатный буферный раствор рН 7,0 (5)
28,4 г динатрия гидрофосфата безводного растворяют в 800,0 мл воды. Доводят рН до 7,0 потенциометрически с помощью 30 % раствора фосфорной кислоты и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
0,025 М фосфатный буферный раствор рН 7,0
1 объём 0,063 М фосфатного буфера рН 7,0 смешивают с 1,5 объёмами воды.
0,03 М фосфатный буферный раствор рН 7,0
5,2 г дикалия гидрофосфата растворяют в 900,0 мл воды. Доводят рН до 7,0 с помощью фосфорной кислоты концентрированной и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
0,063 М фосфатный буферный раствор рН 7,0
5,18 г динатрия гидрофосфата безводного и 3,65 г натрия дигидрофосфата моногидрата растворяют в 950,0 мл воды. Доводят рН до 7,0 потенциометрически с помощью фосфорной кислоты концентрированной и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
0,067 фосфатный буферный раствор рН 7,0
Раствор I. 0,908 г калия дигидрофосфата растворяют в воде и доводят объём раствора водой до 100,0 мл.
Раствор II. 2,38 г динатрия гидрофосфата растворяют в воде и доводят объём раствора водой до 100,0 мл.
38,9 мл раствора I смешивают с 61,1 мл раствора II; если необходимо, доводят рН до 7,0 потенциометрически раствором I или II.
0,1 М фосфатный буферный раствор рН 7,0
1,361 г калия дигидрофосфата растворяют в воде и доводят объём раствора водой до 100,0 мл. Доводят рН до 7,0 потенциометрически с помощью 35 г/л раствора динатрия гидрофосфата
Тетрабутиламмония буферный раствор рН 7,0
6,16 г аммония ацетата растворяют в смеси 15,0 мл 400 г/л раствора тетрабутиламмония гидроксида и 185,0 мл воды. Если необходимо, доводят рН до 7,0 потенциометрически с помощью азотной кислоты концентрированной.
Буферный раствор рН 7,2
250,0 мл 0,2 М раствора калия дигидрофосфата смешивают с 175,0 мл 0,2 М раствора натрия гидроксида. Доводят рН до 7,2 потенциометрически 0,2 М раствором калия дигидрофосфата или 0,2 М раствором натрия гидроксида и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
8,0 г натрия хлорида, 0,2 г калия хлорида, 0,1 г кальция хлорида безводного, 0,1 г магния хлорида, 3,18 г динатрия гидрофосфата и 0,2 г калия дигидрофосфата растворяют в воде и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
10,75 г динатрия гидрофосфата, 7,6 г натрия хлорида и 10,0 г альбумина бычьего растворяют в воде и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл. Непосредственно перед использованием доводят рН до 7,2 потенциометрически с помощью раствора натрия гидроксида разведённого 8,5 % или фосфорной кислоты разведённой 10 %.
10,75 г динатрия гидрофосфата, 7,6 г натрия хлорида, 1,0 г альбумина бычьего растворяют в воде и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл. Непосредственно перед использованием доводят рН до 7,2 потенциометрически с помощью раствора натрия гидроксида разведённого 8,5 % или фосфорной кислоты разведённой 10 %.
Имидазольный буферный раствор рН 7,3
3,4 г имидазола и 5,8 г натрия хлорида растворяют в воде, приливают 18,6 мл 1 М раствора хлористоводородной кислоты и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл; если необходимо, доводят рН до 7,3 потенциометрически 1 М раствором хлористоводородной кислоты.
Буферный раствор рН 7,4
0,6 г калия дигидрофосфата, 6,4 г динатрия гидрофосфата и 5,85 г натрия хлорида растворяют в воде, если необходимо, доводят рН до 7,4 потенциометрически 0,1 М раствором хлористоводородной кислоты или 0,1 М раствором натрия гидроксида и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
Барбитал-буферный раствор рН 7,4
50,0 мл раствора, содержащего 19,44 г/л натрия ацетата и 29,46 г/л барбитал-натрия, смешивают с 50,5 мл 0,1 М раствора хлористоводородной кислоты, прибавляют 20,0 мл 85 г/л раствора натрия хлорида и доводят объём раствора водой до 250,0 мл.
Фосфатный буферный раствор рН 7,4
393,4 мл 0,1 М раствора натрия гидроксида смешивают с 250,0 мл 0,2 М раствора калия дигидрофосфата.
6,08 г трис(гидроксиметил)аминометана и 8,77 г натрия хлорида растворяют в 500 мл воды, прибавляют 10,0 г альбумина бычьего. Доводят рН до 7,4 потенциометрически с помощью хлористоводородной кислоты концентрированной и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
Трис – натрия ацетата буферный раствор рН 7,4
6,3 г трис(гидроксиметил)аминометана и 4,9 г натрия ацетата безводного растворяют в 900,0 мл воды. Доводят рН до 7,4 с помощью серной кислоты концентрированной и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
30,0 г трис(гидроксиметил)аминометана, 14,5 г натрия ацетата безводного, 14,6 г натрия хлорида растворяют в 900,0 мл воды и прибавляют 0,50 г альбумина бычьего. Доводят рН до 7,4 потенциометрически с помощью серной кислоты концентрированной и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
2,38 г динатрия гидрофосфата, 0,19 г калия дигидрофосфата и 8,0 г натрия хлорида растворяют в воде, если необходимо, доводят рН до 7,4 потенциометрически 0,1 М раствором хлористоводородной кислоты или 0,1 М раствором натрия гидроксида и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
Боратный буферный раствор рН 7,5
2,5 г натрия хлорида, 2,85 г натрия тетрабората и 10,5 г борной кислоты растворяют в воде, если необходимо, доводят рН до 7,5 потенциометрически 0,1 М раствором хлористоводородной кислоты или 0,1 М раствором натрия гидроксида и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
Хранят при температуре от 2 до 8 ºС.
Буферный (HEPES) раствор рН 7,5
2,38 г 2-[4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-ил]этансульфоновой кислоты растворяют в 90 мл воды. Доводят рН до 7,5 потенциометрически с помощью 20 % раствора натрия гидроксида и доводят объём раствора водой до 100,0 мл.
0,2 М фосфатный буферный раствор рН 7,5
27,22 г калия дигидрофосфата растворяют в 930,0 мл воды. Доводят рН до 7,5 потенциометрически с помощью 300 г/л раствора калия гидроксида и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
0,33 М фосфатный буферный раствор рН 7,5
Раствор I. 119,31 г динатрия гидрофосфата растворяют в воде и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
Раствор II. 45,36 г калия дигидрофосфата растворяют в воде и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
85,0 мл раствора I смешивают с 15,0 мл раствора II; если необходимо, доводят рН до 7,5 потенциометрически раствором I или раствором II.
7,27 г трис(гидроксиметил)аминометана и 5,27 г натрия хлорида растворяют в воде. Если необходимо, доводят рН до 7,5 потенциометрически исходным раствором трис(гидроксиметил)аминометана или 0,1 М раствором хлористоводородной кислоты и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
0,05 М трис – гидрохлорида буферный раствор рН 7,5
6,057 г трис(гидроксиметил)аминометана растворяют в воде. Если необходимо, доводят рН до 7,5 потенциометрически с помощью хлористоводородной кислоты концентрированной и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
Натрия цитрата буферный раствор рН 7,8 (0,034 М натрия цитрата и 0,101 М натрия хлорида раствор)
10,0 г натрия цитрата и 5,90 г натрия хлорида растворяют в 900,0 мл воды. Доводят рН до 7,8 потенциометрически с помощью хлористоводородной кислоты концентрированной и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
Буферный раствор рН 8,0
50,0 мл 0,2 М раствора калия дигидрофосфата смешивают с 46,8 мл 0,2 М раствора натрия гидроксида и доводят объём раствора водой до 200,0 мл.
Буферный раствор рН 8,0 (1)
20,0 г дикалия гидрофосфата растворяют в 900,0 мл воды. Доводят рН до 8,0 потенциометрически с помощью фосфорной кислоты концентрированной и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
0,0015 М боратный буферный раствор рН 8,0
0,572 г натрия тетрабората и 2,94 г кальция хлорида растворяют в 800,0 мл воды. Доводят рН до 8,0 с помощью 1 М раствора хлористоводородной кислоты и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
0,02 М фосфатный буферный раствор рН 8,0
50,0 мл 0,2 М раствора калия дигидрофосфата смешивают с 46,8 мл 0,2 М раствора натрия гидроксида и доводят объём раствора водой до 500,0 мл.
0,1 М фосфатный буферный раствор рН 8,0
0,523 г калия дигидрофосфата и 16,73 г дикалия гидрофосфата растворяют в воде и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
1 М фосфатный буферный раствор рН 8,0
136,1 г калия дигидрофосфата растворяют в воде. Доводят рН до 8,0 потенциометрически с помощью 1 М раствора натрия гидроксида и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
Трис – натрия ацетатный буферный раствор рН 8,0
6,3 г трис(гидроксиметил)аминометана и 4,9 г натрия ацетата безводного растворяют в 900,0 мл воды. Доводят рН до 8,0 потенциометрически с помощью серной кислоты концентрированной и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
1 М трис – гидрохлоридный буферный раствор рН 8,0
121,1 г трис (гидроксиметил)аминометана и 1,47 г кальция хлорида растворяют в 900,0 мл воды. Доводят рН до 8,0 потенциометрически с помощью хлористоводородной кислоты концентрированной и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
Трис – гидрохлоридный буферный раствор рН 8,0
1,21 г трис (гидроксиметил)аминометана и 29,4 мг кальция хлорида растворяют в воде. Доводят рН до 8,0 потенциометрически с помощью 1 М раствора хлористоводородной кислоты и доводят объём раствора водой до 100,0 мл.
0,294 г кальция хлорида растворяют в 40,0 мл раствора трис(гидрокси-метил)аминометана 24,22 г/л. Доводят рН до 8,1 потенциометрически с помощью 1 М раствора хлористоводородной кислоты и доводят объём раствора водой до 100,0 мл.
Трис – глицина буферный раствор рН 8,3
6,0 г трис(гидроксиметил)аминометана и 28,8 г глицина растворяют в 500,0 мл воды и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл. Непосредственно перед использованием 1 объём приготовленного раствора доводят водой до 10 объёмов.
Барбитала буферный раствор рН 8,4
8,142 г барбитал-натрия и 0,287 г натрия ацетата растворяют в воде, добавляют 90,0 мл 0,1 M хлористоводородной кислоты и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
Трис – EDTA – BSA буферный раствор рН 8,4
6,1 г трис(гидроксиметил)аминометана, 2,8 г натрия эдетата, 10,2 г натрия хлорида и 10,0 г альбумина бычьего растворяют в воде. Доводят рН до 8,4 потенциометрически с помощью 1 М раствора хлористоводородной кислоты и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
5,12 г натрия хлорида, 3,03 г трис(гидроксиметил)аминометана и 1,40 г натрия эдетата растворяют в 250,0 мл воды. Доводят рН до 8,4 потенциометрически с помощью хлористоводородной кислоты концентрированной и доводят объём раствора водой до 500,0 мл.
Фосфатный буферный раствор рН 8,5
3,5 г дикалия гидрофосфата и 4,5 г натрия хлорида растворяют в 500,0 мл воды. Доводят рН до 8,5 потенциометрически с помощью смеси равных объёмов фосфорной кислоты разведённой 10 % и воды.
Трис – ацетатный буферный раствор рН 8,5
0,294 г кальция хлорида и 12,11 г трис(гидроксиметил)аминометана растворяют в воде. Доводят рН до 8,5 потенциометрически с помощью уксусной кислоты разведенной 30 % и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
Трис – боратный буферный раствор с трилоном Б рН 8,6 – 8,8
60,5 г трис(гидроксиметил)аминометана, 6,0 г трилона Б, 19,0 г борной кислоты последовательно растворяют в воде в мерном цилиндре вместимостью 1000,0 мл, доводят объём раствора водой до метки и перемешивают. При необходимости раствор фильтруют через бумажный фильтр. Раствор хранят при температуре 2 – 8 °С не более 3 мес.
1,5 М трис – гидрохлоридный буферный раствор рН 8,8
90,8 г трис(гидроксиметил)аминометана растворяют в 400 мл воды. Доводят рН до 8,8 потенциометрически с помощью хлористоводородной кислоты концентрированной и доводят объём раствора водой до 500,0 мл.
Буферный (фосфатный) раствор рН 9,0
1,74 г калия дигидрофосфата растворяют в 80 мл воды. Доводят рН до 9,0 потенциометрически с помощью 1 М раствора калия гидроксида и доводят объём раствора водой до 100,0 мл.
Буферный раствор рН 9,0
Раствор I. 6,18 г борной кислоты растворяют в 0,1 М растворе калия хлорида и доводят объём раствора тем же растворителем до 1000,0 мл.
Раствор II. 0,1 М раствор натрия гидроксида.
1000,0 мл раствора I смешивают с 420,0 мл раствора II.
Буферный раствор рН 9,0 (1)
6,20 г борной кислоты растворяют в 500,0 мл воды. Доводят рН до 9,0 потенциометрически с помощью 1 М раствора натрия гидроксида (около 41,5 мл) и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
Аммония хлорида буферный раствор рН 9,5
33,5 г аммония хлорида растворяют в 150,0 мл воды, прибавляют 42,0 мл раствора аммиака концентрированного 25% и доводят объём раствора водой до 250,0 мл. Хранят в полиэтиленовой упаковке.
Аммония хлорида буферный раствор рН 10,0
5,4 г аммония хлорида растворяют в 20,0 мл воды, приливают 35,0 мл раствора аммиака и доводят объём раствора водой до 100,0 мл.
Диэтаноламина буферный раствор рН 10,0
96,4 г диэтаноламина растворяют в воде, доводят объём раствора водой до 400,0 мл, прибавляют 0,5 мл 186 г/л раствора магния хлорида. Доводят рН до 10,0 потенциометрически с помощью 1 М раствора хлористоводородной кислоты и доводят объём раствора водой до 500,0 мл.
0,1 М аммония карбоната буферный раствор рН 10,3
7,91 г аммония карбоната растворяют в 800,0 мл воды. Доводят рН до 10,3 потенциометрически с помощью раствора натрия гидроксида разведённого 8,5 % и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
Аммония хлорида буферный раствор рН 10,4
70,0 г аммония хлорида растворяют в 200,0 мл воды, прибавляют 330,0 мл раствора аммиака концентрированного 25% и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл. Если необходимо, доводят рН до 10,4 потенциометрически с помощью раствора аммиака 17%.
Боратный буферный раствор 10,4
24,64 г борной кислоты растворяют в 900,0 мл воды. Доводят рН до 10,4 потенциометрически с помощью 400 г/л раствора натрия гидроксида и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
Буферный раствор рН 10,9
6,75 г аммония хлорида растворяют в растворе аммиака (см. ОФС «Реактивы. Индикаторы») и доводят объём раствора тем же растворителем до 100,0 мл.
Буфер для регулирования ионной силы
58,5 г натрия хлорида, 57,0 мл уксусной кислоты ледяной, 61,5 г натрия ацетата и 5,0 г циклогексилендинитрилтетрауксусной кислоты растворяют в воде и доводят объём раствора водой до 500,0 мл. Доводят рН до 5,0 – 5,5 с помощью 335 г/л раствора натрия гидроксида и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
Буфер для регулирования ионной силы (1)
Раствор (а). 210,0 г лимонной кислоты растворяют в 400,0 мл воды. Доводят рН до 7,0 потенциометрически с помощью раствора аммиака концентрированного 25 % и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
Раствор (б). 132 г аммония фосфата растворяют в воде и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
Раствор (в). К суспензии 292,0 г (этилендинитрил)тетрауксусной кислоты в 500,0 мл воды прибавляют 200,0 мл раствора аммиака концентрированного 25%. Доводят рН до 6,0-7,0 потенциометрически с помощью раствора аммиака концентрированного 25% и доводят объём раствора водой до 1000,0 мл.
Смешивают равные объёмы растворов (a), (б), (в) и доводят рН до 7,5 с помощью раствора аммиака концентрированного 25 %.
