Фрагментация днк значение 62 что значит
Фрагментация днк значение 62 что значит
Фрагментация ДНК, метод SCD, ФДНКС.
Синонимы английские
Sperm dna fragmentation, SCD assay, sDF.
HALOSPERM-тест (метод SCD).
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Как правильно подготовиться к исследованию?
Общая информация об исследовании
В последние годы большое внимание уделяется значимости определения степени фрагментации ДНК сперматозоидов. Целостность генома сперматозоида нарушается при различных видах интоксикаций, воздействии профессиональных вредностей, неблагоприятных экологических факторах, неправильном образе жизни, варикоцеле и инфекционно-воспалительных заболеваниях мужских половых органов, курении, употреблении наркотических средств, лихорадке, в пожилом возрасте и др. Чем выше количество поражений ДНК, тем ниже целостность генетического материала и вероятность наступления беременности.
Сперматозоиды, содержащие поврежденную ДНК, могут сохранять способность к оплодотворению. Однако повышенная фрагментация ДНК может быть причиной неудач при выполнении процедур ЭКО и привычных выкидышей при естественном оплодотворении. Кроме того, повреждения ДНК сперматозоидов повышают риск онкогенетических заболеваний и передачи генетических дефектов потомству.
Метод SCD (sperm chromatin dispersion test) представляет собой анализ дисперсии хроматина сперматозоида. Это исследование фрагментации ДНК сперматозоидов. Он основан на том принципе, что сперматозоиды с фрагментированной ДНК не способны производить характерный ореол, который наблюдается, когда эякулят смешивается со специальными ферментами. После окрашивания ядра сперматозоидов с повышенной фрагментацией ДНК производят очень маленькие ореолы дисперсии ДНК или совсем не образуют их, тогда как сперматозоиды с низким уровнем фрагментации ДНК высвобождают свои петли ДНК, формируя большие ореолы.
Таким образом, мужчины с бесплодием имеют более высокий уровень фрагментации ДНК сперматозоидов по сравнению с фертильными мужчинами.
Для чего используется исследование?
Когда назначается исследование?
Что означают результаты?
Кто назначает исследование?
Фрагментация ДНК сперматозоидов. Есть ли связь с основными параметрами спермы и возрастом?
ВВЕДЕНИЕ
Стандартное спермиологическое исследование, выполняемое согласно руководству ВОЗ, остается на сегодняшний день основным методом оценки мужской фертильности [1]. Вместе с тем, данный метод исследования имеет ряд существенных ограничений, в том числе низкую прогностическую ценность в отношении результатов программ вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) и исходов беременности, достигнутой естественным путем [2].
Ограничения стандартного спермиологического исследования диктуют необходимость использования дополнительных методов оценки мужской фертильности. В качестве наиболее перспективного и широко используемого теста выступает оценка уровня фрагментации ДНК сперматозоидов. Результаты недавних исследований демонстрируют связь уровня фрагментации ДНК сперматозоидов с нарушением развития эмбрионов в программах ВРТ, вероятностью наступления беременности в программах ВРТ и при естественном зачатии, а также с невынашиванием беременности 6.
Вопрос широкого внедрения исследования фрагментации ДНК сперматозоидов в клиническую практику и определение показаний к данному исследованию по-прежнему обсуждается. Важным фактором, ограничивающим его использование, является отсутствие стандартизации существующих методов оценки фрагментации ДНК [9]. Дополнительным фактором, ограничивающим широкое внедрение исследования фрагментации ДНК сперматозоидов (ФДС) в диагностику мужского бесплодия, является стоимость. По сравнению с другими тестами на фертильность мужчин, тест на фрагментацию ДНК является дорогостоящим, при этом расходы, как правило, ложатся на пациента. В связи с этим активно изучается корреляция между уровнем фрагментации ДНК сперматозоидов и стандартными параметрами спермы, что потенциально может позволить отбирать пациентов, которым выполнять исследование фрагментации ДНК сперматозоидов нецелесообразно.
Целью настоящего исследования явилось изучение связи уровня фрагментации ДНК сперматозоидов с показателями стандартного спермиологического исследования и возрастом мужчин.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Материалом для исследования послужили результаты обследования 121 мужчины в возрасте от 21 года до 53 лет (средний возраст 32,7±4,5 года), прошедших обследование в клинике «Мать и Дитя Ярославль» в период с января 2019 по апрель 2020 года. Исследование носило ретроспективный характер, в связи с чем, фертильный статус мужчин не уточнялся. Критериями исключения для настоящего исследования были тяжелые формы олигозооспермии (концентрация сперматозоидов менее 1 млн/мл) и азооспермия.
Спермиологическое исследование
Образцы спермы были собраны в специально отведенном для этого помещении нашей лаборатории с помощью аудиовизуальной стимуляции после 2-5 дней сексуального воздержания. Стандартное спермиологическое исследование выполнялось согласно последнему изданию Руководства ВОЗ [1].
Исследование уровня фрагментации ДНК сперматозоидов
Повреждение ДНК сперматозоидов оценивали с помощью анализа TUNEL (Terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling) на основе проточной цитометрии и сообщали % фрагментации ДНК сперматозоидов, отражая процент сперматозоидов с поврежденной ДНК.
Статистическая обработка
Статистический анализ проводили с использованием программного обеспечения SPSS 11.0 (SPSS Inc., Чикаго, Иллинойс). С целью выявления взаимосвязи уровня фрагментации ДНК сперматозоидов и стандартных параметров спермы, а также возраста мужчин, был применен метод корреляционного анализа с расчетом коэффициента параметрической корреляции Пирсона. Критерием статистической значимости корреляции считали p 0,7- сильная связь. Критерий Манна-Уитни использовали для оценки значимости различий непараметрических непрерывных переменных, таких как параметры спермы. Результаты выражены как среднее значение ± стандартное отклонение.
РЕЗУЛЬТАТЫ
Исследование уровня фрагментации ДНК сперматозоидов у 121 мужчины продемонстрировало значения в интервале от 1% до 45,7%, средний показатель 11,4± 7,8%. У 30 пациентов уровень фрагментации ДНК был более 15% (среднее значение 22,0±7,2%), а у 91 пациента уровень фрагментации ДНК был менее 15% (среднее значение 7,9±3,9%). В таблице 1 представлены средние значения параметров стандартного спермиологического исследования в общей выборке и в подгруппах с уровнем ФДС 15% (n = 30)
FDS >15% (n = 30)
Сравнительный анализ групп пациентов с ФДС 15%) в группах нормальный объем спермы/олигоспермия, нормальная концентрация сперматозоидов/олигозооспермия, нормальная морфология/тератозооспермия, нормальная прогрессивная подвижность сперматозоидов /астенозооспермия (табл. 3).
Таблица 3. Частота встречаемости нормальной и повышенной фрагментации ДНК сперматозоидов в подгруппах нормальное значение параметров спермы/отклонение от нормы
Table 3. Frequency of occurrence of normal and increased sperm DNA fragmentation in subgroups of normal sperm parameter / deviation from the norm
| Параметр Parameter | Фрагментация ДНК сперматозоидов Sperm DNA fragmentation | Асимптотическая значимость (2-сторонняя) Asymptotic significance (2-sided) | ||
|---|---|---|---|---|
| ФДС 15% FDS >15% | ||||
| Объем эякулята Volume | Нормальный объем, % (n) Normal volume, % (n) | 95,7% (89) | 100,0% (28) | 0,641 |
| Олигоспермия, % (n) Oligospermia, % (n) | 4,3% (4) | 0,0% (0) | ||
| Концентрация Concentration | Нормальная концентрация, % (n) Normal concentration, % (n) | 87,1% (81) | 82,1% (23) | 0,157 |
| Олигоспермия, % (n) Oligospermia, % (n) | 12,9% (12) | 17,9% (5) | ||
| Прогрессивная подвижность Progressive mobility | Нормальная прогрессивная подвижность, % (n) Normal progressive mobility, % (n) | 88,2% (82) | 78,6% (22) | 0,036 |
| Астенозооспермия, % (n) Asthenozoospermia, % (n) | 11,8% (11) | 21,4% (6) | ||
| Морфология Morphology | Нормальная морфология, % (n) Normal morphology, % (n) | 13,2% (12) | 10,0% (3) | 0,296 |
| Тератозооспермия, % (n) Teratozoospermia, % (n) | 86,8% (79) | 90,0% (27) | ||
Результаты анализа продемонстрировали, что повышенная ФДС в 1,8 раз чаще встречается среди пациентов с астенозооспермией (21,4%) по сравнению с пациентами с нормальной подвижностью сперматозоидов (11,8%) (p NS
Ни одно из представленных исследований не выявило взаимосвязи между объемом эякулята и уровнем ФДС. Слабая отрицательная корреляция между концентрацией сперматозоидов и уровнем ФДС выявлена в двух из 11 представленных исследований [15, 16]. Значимая отрицательная корреляция доли прогрессивно подвижных сперматозоидов с уровнем ФДС отмечена в 6 исследованиях, при этом уровень связи варьировал от слабой до умеренной [17-20, 21]. Умеренная отрицательная связь доли морфологически нормальных форм и уровня ФДС наблюдалась в 4 исследованиях, в одном исследовании имела место слабая отрицательная корреляция, а в 5 исследованиях связи между морфологией сперматозоидов и уровнем ФДС не выявлено [10, 15, 20, 22-24]. В одном из представленных исследований продемонстрирована слабая положительная корреляция уровня ФДС с долей аномалий головки в структуре морфологических дефектов [22], в то время как результаты проведенного нами исследования не выявили связи между этими параметрами.
ДНК-фрагментация сперматозоидов как фактор мужского бесплодия
Сложным термином «фрагментация ДНК сперматозоидов» в медицине называют дефект генетического материала, который содержится в ядре мужской половой клетки. Это серьезное нарушение, и с ним сложно справиться. Если в сперме много сперматозоидов с таким дефектом – она теряет фертильность, т. е. не может оплодотворить яйцеклетку. Поэтому ДНК-фрагментация выступает одной из причин мужского бесплодия, и, несмотря на серьезность проблемы, с ней необходимо бороться с помощью определенного лечения.
Норма ДНК-фрагментации сперматозоидов
Фрагментация – это обрывки молекул ДНК, которые образуются, когда нарушается целостность структуры нуклеиновых цепочек. В сперме может содержаться разное количество сперматозоидов с таким нарушением. И это нормально, поскольку в организме действует процесс отбраковки, за счет которого дефектные клетки удаляются, но часть их все же остается. Поэтому в медицине установлена норма ДНК-фрагментации сперматозоидов. Она составляет 15% – пороговое значение, при превышении которого говорят о наличии отклонений.
Как определяют
Чтобы определить индекс фрагментации ДНК сперматозоидов, прибегают к специальным тестам. Для них используют сперму, которую берут как в случае со спермограммой (путем мастурбации). В течение 3-5 дней до анализа мужчине необходимо воздерживаться:
За 2 недели до исследования нужно отказаться от антибиотиков. Еще в этот период у мужчины не должно быть заболеваний с повышенной температурой.
Основные методы определения фрагментации ДНК сперматозоидов:
Анализ рекомендуют сдавать при невозможности зачать, повторяющемся невынашивании беременности и неудачных попытках ЭКО, подготовке к ЭКО и ИКСИ, а также при обнаружении отклонений в спермограмме.
Расшифровка результатов проводится по-разному в зависимости от вида теста. Для TUNEL установлены следующие значения:
HALOSPERM-тест имеет свои показатели:
Причины и опасность высокой ДНК-фрагментации
Нуклеиновые цепочки в составе ДНК могут разрываться под влиянием внутренних или внешних факторов. Все причины можно разделить на 2 группы:
К указанным процессам могут приводить разные факторы:
В первую очередь повышенная фрагментация ДНК сперматозоидов влияет на репродуктивную функцию. Чем больше спермиев с дефектом генетического материала, тем меньше вероятность, что зачатие произойдет естественным путем. Если оно случится, то высок риск, что у ребенка могут быть генетические нарушения и онкологические заболевания.
Лечение ДНК-фрагментации сперматозоидов
При выявлении повышенной фрагментации ДНК спермиев врач может назначить ряд дополнительных исследований, чтобы найти причину нарушения. Улучшить ситуацию может отказ от вредных привычек, излечение от инфекционного заболевания, смена рода деятельности, ограждение от стрессов.
Если причина – варикоцеле, его устраняют хирургическим путем. Дополнительно мужчине может назначаться антиоксидантная терапия и рекомбинантный (человеческий) фолликулостимулирующий гормон (ФСГ). Лечение подбирает врач, исходя из особенностей каждого конкретного случая. Поэтому при проблемах с зачатием в первую очередь необходимо обратиться к специалисту. Клиника Dr. AkNer приглашает вас на консультацию к урологу и андрологу. Записывайтесь на прием в форме на сайте или по контактному телефону +7 (495) 098-03-03.
Что такое фрагментация ДНК в сперматозоидах
Тест на фрагментацию ДНК сперматозоидов
Адрес лаборатории: Москва, ул. Беговая, д. 7 стр. 2
+ Записаться на прием
Содержание:
Одной из причин мужского бесплодия является нарушение целостности цепочек ДНК, в которых заложена генетическая информация о будущем ребенке. В эякуляте каждого мужчины содержится определенный процент сперматозоидов с поврежденной ДНК. Если уровень фрагментации ДНК сперматозоидов находится в норме (не превышает порогового значения в 15%), вероятность зачатия высока, и пара радуется наступившей беременности, даже не подозревая о возможных проблемах. Но вдруг что-то идет не так, и беременность прерывается. Если это происходит раз за разом, обоим партнерам необходимо пройти обследование.
Нарушение целостности структуры нуклеиновых цепочек приводит к образованию обрывков молекулы ДНК, что и называется фрагментацией. Чем выше содержание сперматозоидов с фрагментацией ДНК, тем меньше шансов на естественное зачатие. В случае если оно все же произошло, велика вероятность развития у ребенка онкологических заболеваний и генетических нарушений.
Причины фрагментации
Разрывы цепочек ДНК могут возникнуть под воздействием внешних и внутренних факторов.
Внутренние факторы, приводящие к нарушению целостности цепочек ДНК, можно условно разделить на две большие группы: сбой в механизме отбраковки и нарушение созревания сперматозоидов.
Формирование сперматозоидов с нарушениями ДНК вовсе не повод для беспокойства. В большинстве случаев дефектные клетки отбраковываются и удаляются из организма. Но если этот механизм дает сбой, концентрация дефектных клеток возрастает, что неизбежно ведет к проблемам с зачатием.
Другой причиной высокого содержания сперматозоидов с фрагментацией ДНК может быть неадекватное вызревание, приводящее к конденсации хроматина клеточного ядра и снижению содержания протаминов, обеспечивающих стабильность молекулы ДНК.
К внешним факторам относятся:
Типы тестов и подготовка к исследованию
Для оценки фрагментации ДНК разработано несколько видов тестов. Наиболее популярные из них следующие:
При подготовке к тесту нужно соблюсти несколько условий:
Расшифровка результатов
Результат исследования оформляется в табличной форме, где приведен полученный результат в процентах и указано референсное значение для данного вида теста.
Для TUNEL-теста расшифровка выглядит следующим образом:
Ниже приведена интерпретация результатов HALO-теста:
Лечение фрагментации ДНК сперматозоидов
Фрагментация ДНК может не являться симптомом заболевания. В данном случае корректно говорить о патологическом состоянии. Если патология вызвана какими-либо внешними причинами, целесообразно устранить их насколько это возможно в конкретном случае. Зачастую улучшить параметры эякулята можно, например, при смене рода деятельности, изменении условий жизни, отказе от внешних привычек, излечении от инфекционного заболевания и т. д.
Многие пары сталкиваются с проблемой отсутствия зачатия или невынашивания беременности. До недавних пор бытовало мнение, что вся ответственность за это лежит на женщине. Некоторые полагают, что раз оплодотворение произошло, вся дальнейшая ответственность лежит на женщине. Это не совсем так. Сегодня медицина пришла к выводу, что в основе почти половины случаев бесплодия лежит так называемый “мужской фактор”.
Чтобы обезопасить будущего ребенка и с радостью провести время в ожидании его появления на свет рекомендуем еще на этапе планирования беременности пройти обследование обоим партнерам.
Причины репродуктивных потерь у мужчин – фрагментация ДНК сперматозоидов
*Пятилетний импакт фактор РИНЦ за 2020 г.
Читайте в новом номере
Введение
В настоящее время около 15–20% всех наступивших беременностей заканчиваются неудачно — это либо беременность, либо невынашивание (выкидыш) [1, 2]. Также к данной категории можно отнести и внематочную беременность. Все эти состояния относятся к репродуктивным потерям беременности. Значительную долю среди них составляют неудачные попытки применения программ вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) — неразвивающиеся беременности после экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) и/или интрацитоплазматической инъекции сперматозоида (ИКСИ).
Основными причинами ПНБ на сегодняшний день являются: инфекции мочеполовой системы, нарушения гемостаза (предрасположенность к тромбофилиям, нарушения фолатного цикла и др.), антифосфолипидный синдром, совпадения в системе Ь^А (II класса), хромосомные анеуплоидии [4, 5].
Новый взгляд на роль мужчины при ПНБ
В то же время остается невыясненной роль мужского фактора в ПНБ. До сих пор считалось, что у мужчин необходимо только лечение заболеваний мочеполовой системы. Следовало добиться эрадикации возбудителей инфекций, передающихся половым путем (хламидии, микоплазмы, уреаплазмы, гарднереллы ). Однако в последнее время были выяснены новые обстоятельства.
Как известно, с возрастом у женщин снижаются овариальный резерв и целостность ооцитов. У мужчин существует способность поддерживать определенный уровень фертильности в течение всей жизни, однако эта функция ухудшается постепенно. Наблюдаются снижение уровня половых гормонов, ухудшение сексуальной функции, ухудшение показателей сперматогенеза и, как следствие, снижение фертильности. Кроме того, увеличиваются неблагоприятные исходы беременности, мутации сперматозоидов de novo (растут на 4% в год), чаще встречаются хромосомные анеуплоидии. Все это приводит к репродуктивным потерям беременности или врожденным дефектам и заболеваниям у потомства [6].
Влияние отцовского возраста на качество спермы
Возрастные изменения обычных параметров спермы проявляются в сокращении объема спермы, уменьшении общего количества сперматозоидов, ухудшении подвижности и морфологии сперматозоидов. При этом концентрация сперматозоидов достоверно не меняется. Многие изменения до настоящего времени остаются предметом дискуссии. Этиология изменений связана с накоплением с возрастом сопутствующих заболеваний, таких как: сосудистая недостаточность (диабет, артериальная гипертензия), хронические инфекции (простатит и др.), ожирение, гормональная недостаточность. Однако до конца этиология все еще четко не определена [6].
L. Vagnini et al. оценивали влияние возраста на качество спермы. Оказалось, что с возрастом уменьшается количество и ухудшается качество сперматозоидов, увеличивается количество сперматозоидов с большими ядерными вакуолями (более 50% объема ядра), значительно возрастает степень фрагментации ДНК сперматозоидов (TUNEL, p ® ). До и после исследования проводился анализ спермы. В группу контроля вошли 40 мужчин с бесплодием, не получавшие никакой терапии. У них также определялись изменения показателей по сравнению с исходными данными.
Было установлено, что результаты значительно улучшились в основной группе после 3 мес. лечения. Медиана показателей анализа изменилась с 56% в исходной точке до 74% в конце исследования (р Литература
Только для зарегистрированных пользователей