Как сделать десятикратное разведение

Для переноса каждого разведения используют отдельную стерильную пипетку, кроме случаев, когда работу ведут от самого высокого разведения к самым низким разведениям.

3. Количество чашек Петри на каждое разведение.В микробиологии пищевых продуктов обычно используют одну чашку на каждое разведение микроорганизмов согласно требованиям ISO/IEC 17025. В других случаях следует использовать две чашки для каждого разведения в соответствии с ISO 8199

МЕТОДЫ ПОСЕВА В ЧАШКИ

Посев в глубину питательной среда

1. Отбирают определенные объемы разведений для исследования, касаясь наконечником пипетки боковой стенки пробирки, чтобы удалить избыточную жидкость с внешней стороны пипетки.

2. Поднимают крышку стерильной чашки Петри так, чтобы было возможно внести содержимое пипетки в чашку.

4. Расплавленную среду и инокулят немедленно тщательно перемешивают для получения равномерного распределения микроорганизмов в питательной среде.

5. Далее чашки помещают на горизонтальную поверхность, чтобы дать время охладиться и затвердеть питательной среде (время затвердевания агара не должно превышать 10 мин).

6. После расплавления агаровой среды, доведенной до необходимого состояния, флакон из водяной бани высушивают сухим чистым полотенцем, чтобы предотвратить загрязнение чашек водой бани.

7. Необходимо следить, чтобы среда не попадала на внешнюю сторону флакона или на внутреннюю часть крышки чашки Петри во время разливки е чашки. Для этого флакон или колбу необходимо держать фактически в горизонтальном положении и воздержаться от возврата флакона в вертикальное положение между этапами разливки питательной среды.

8. Если в исследуемом продукте предполагается присутствие колоний (например, виды Proteus) с «ползучим» ростом, используют для анализа слой со стерильным «голодным» агаром или идентичной питательной средой, наносимой на затвердевший агар в чашки с посеянным материалом, чтобы предотвратить или свести к минимуму распространение такого «ползучего» роста.

Поверхностный посев

2. Используют предварительно заполненные агаровой средой чашки, толщина агарового слоя которых составляет не менее 3 мм. Слой агара должен быть ровным и не содержать пузырьков воздуха и поверхностной влаги.

3. Чтобы облегчить равномерное распределение, поверхность затвердевшего агара необходимо подсушить в соответствии с ISO/TS 11133 или, как определено другим соответствующим международным стандартом. В таком случае посевной материал абсорбируется в течение 15 мин.

Источник

Как сделать десятикратное разведение

ГОСТ 26669-85 (СТ СЭВ 3014-81). Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов.

а) Общие замечания. Из каждой пробы продукта в зависимости от определяемых показателей отбирают асептически одну или несколько навесок для приготовления разведений и (или) непосредственного высева на питательные среды. Масса (объем) отбираемых навесок установлена в соответствующих нормативно-технических документах на вид исследуемого продукта. Навеску продукта следует отбирать так, чтобы в ней были представлены все его компоненты и в том же соотношении, что и в анализируемой пробе продукта. Навески продукта берут стерильно из разных мест пробы, с поверхности и из глубины.

Продукты, имеющие кислую реакцию (pH 4,0-6,0), перед исследованием нейтрализуют стерильным 10 % раствором двууглекислого натрия до слабощелочной реакции (pH 7,2-7,4). Реакцию среды проверяют при помощи pH-метра или по универсальной индикаторной бумаге.

Масса (объем) навески продукта, предназначенной для приготовления исходного разведения или гомогената, должна составлять не менее 10(±0,1) г (или см 3 ). Для приготовления исходного и последующих разведений используют в зависимости от характера продукта пептонно-солевой раствор или другие. Обычно при приготовлении исходного разведения соотношение между массой (объемом) продукта и объемом пептонно-солевого раствора составляет 1:9, а для продуктов, содержащих большое количество жира без поверхностно-активных веществ, — 1:10. Принимается, что 1 мл приготовленной таким образом взвеси содержит 0,1 г исходного продук та. В ряде случаев используют шестикратное (соотношение 1:5), четырехкратное (1:3) и двукратное (1:1) исходные разведения.

б) Особенности отбора навесок и приготовления исходных разведений продуктов разной консистенции:

1. Жидкие и вязкие продукты. Навески отбирают из глубины продукта стерильной пипеткой с ватной пробкой. Излишки продукта с поверхности пипетки удаляют стерильным ватным тампоном.

Жидкий продукт, насыщенный углекислым газом, переносят в стерильную посуду (коническую колбу и др.), которую затем закрывают ватной пробкой. Емкость с продуктом подогревают при частом перемешивании круговыми движениями на водяной бане (при температуре 30-37 °С) до тех пор, пока не перестанут выделяться пузырьки газа.

Продукты жидкой консистенции засевают и разводят для посевов без предварительной подготовки. Для более быстрого перемешивания вязких продуктов с пептонно-солевым (или другим) раствором в посуду для приготовления основного разведения помещают несколько стеклянных шариков.

2. Порошкообразные и сыпучие продукты. Навески отбирают из разных мест продукта стерильной ложкой или шпателем (если необходимо, до отбора навески стерильной ложкой удаляют 2 см верхнего слоя продукта). Отобранный продукт переносят в предварительно взвешенную стерильную посуду с крышкой и взвешивают. К навеске добавляют необходимое количество пептонно-солевого раствора. Полученную смесь хорошо перемешивают или взбалтывают до получения однородной консистенции.

Если порошкообразный продукт нерастворим в воде, то после его перемешивания с пептонно-солевым раствором полученную суспензию отстаивают в течение 10 мин и вновь сильно встряхивают в течение 1 мин.

3. Набухающие в воде продукты. Отбирают навески и готовят разведения в соответствии с требованиями нормативно-технической документации на исследуемый вид продукта.

4. Твердые растворимые в воде продукты. Продукты размельчают, размалывают или растирают в асептических условиях. Затем отбирают навески стерильными шпателем или ложкой. Затем поступают так же, как с сыпучими или порошкообразными продуктами.

5. Не растворимые в воде твердые продукты. Для гомогенизации продукта используют гомогенизатор. В среднем общее число оборотов должно составлять 15-20 тыс/мин (не менее 8 тыс. и не более 45 тыс. об/мин).

Гомогенизацию нестерилизованного продукта можно осуществить путем его растирания в стерильной ступке с постепенным добавлением пептонно-солевого раствора до достижения однородной консистенции. При этом необходимо строго соблюдать условия асептики. Затем смесь оставляют при комнатной температуре на несколько минут. Для посевов и разведений взвесь отбирают стерильной пипеткой с широким носиком.

6. Пастообразные продукты. Продукт тщательно перемешивают стерильной ложкой или стеклянной палочкой. Затем поступают так же, как с сыпучими или порошкообразными продуктами.

7. Жидкие жиры. Навески отбирают теплой стерильной пипеткой, нагретой фламбированием. Излишки продукта удаляют с поверхности пипетки стерильным ватным тампоном.

Продукт вносят в посуду с притертой стеклянной пробкой и разводят требуемым количеством пептонно-солевого раствора, подогретого до 40-45 °С (при выявлении психрофильных микроорганизмов температура не должна превышать 37 °С). Остатки жира, прилипшего к пипетке, смывают, несколько раз насасывая и спуская раствор.

8. Твердые жиры. Продукт разрезают стерильным ножом или проволокой на несколько частей. При необходимости удаляют верхний слой. Навеску продукта отбирают с поверхности срезов из разных мест стерильным скальпелем. Затем поступают так же, как с жидкими жирами.

От твердых жиров можно также отбирать навеску но объему. Для этого жиры растапливают в широкогорлой стерильной посуде на водяной бане при температуре не выше 45 °С (при выявлении психрофильных микроорганизмов температура не должна превышать 37 °С). После перемешивания растопленного жира с ним поступают так же, как с жидкими жирами.

9. Взбитые продукты и продукты кашицеобразной консистенции, содержащие много жира. Продукт тщательно перемешивают стерильной стеклянной палочкой. Затем стерильной ложкой отбирают необходимое количество продукта в стерильную предварительно взвешенную посуду. Добавляют необходимое количество пептонно-солевого раствора, подогретого до 40-45 °С.

10. Определение микробного загрязнения поверхности проб продукта. Стерильный ватный тампон смачивают пептонно-солевым раствором и протирают им в разных местах поверхность различных кусков анализируемого продукта общей площадью 100 см 2 (площадь определяют при помощи стерильных шаблонов). Затем тампон помещают в пробирку, содержащую 10 см 3 пептонно-солевого раствора. Тщательно перемешивают содержимое пробирки. Полученную суспензию считают исходным разведением.

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 10.10.2019

Источник

Как сделать десятикратное разведение

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Общее руководство по приготовлению разведений для микробиологических исследований

Microbiology. Feedstuffs, compound feeds, feed raw materials. General guidance for the preparation of dilutions for microbiological examination

____________________________________________________________________
Текст Сравнения ГОСТ Р 51426-2016 с ГОСТ Р 51426-99 см. по ссылке.
— Примечание изготовителя базы данных.
____________________________________________________________________

Дата введения 2018-01-01

Предисловие

1 РАЗРАБОТАН Открытым акционерным обществом «Всероссийский научно-исследовательский институт комбикормовой промышленности» (ОАО «ВНИИКП»)

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 004 «Комбикорма, белково-витаминно-минеральные концентраты, премиксы»

Введение

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на корма, комбикорма и комбикормовое сырье и устанавливает общие правила аэробного приготовления исходной суспензии и десятикратных разведений для микробиологических исследований.

2 Нормативные ссылки

3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

3.1 исходная суспензия, первичное разведение (initial suspension, primary dilution): Суспензия, раствор или эмульсия, полученные путем смешивания определенной массы или объема исследуемой продукции (или анализируемой пробы, отобранной от продукции) с девятикратным объемом разбавителя; при наличии крупных частиц твердой дисперсной фазы суспензию выдерживают до их осаждения.

3.2 ряд десятикратных разведений (further decimal dilutions): Суспензии или растворы, полученные путем смешивания определенного объема исходной суспензии (см. 3.1) с девятикратным объемом разбавителя и повторением этой процедуры с каждым последующим разведением, приготовленным подобным путем, с целью получения нужного разведения, пригодного для инокуляции в питательную среду.

3.3 специальный стандарт (specific standard): Стандарт или руководство, описывающее исследование специальных видов продукции (или группы) для обнаружения или подсчета микроорганизмов определенного вида (или группы микроорганизмов).

4 Сущность метода

5 Требования безопасности

5.1 При выполнении испытаний необходимо соблюдать требования безопасности при работе с микроорганизмами по ГОСТ ISO 7218.

5.2 При выполнении испытаний необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроприборами по ГОСТ 12.2.007.0 и ГОСТ Р 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на используемые приборы.

5.3 Помещение должно быть оснащено вентиляционными системами по ГОСТ 12.4.021, средствами пожаротушения по ГОСТ 12.4.009 и соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004.

5.4 Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать допустимых значений по ГОСТ 12.1.005.

6 Требования к проведению испытаний

6.2 Требования к квалификации оператора

К выполнению испытаний и обработке их результатов допускают специалиста, соответствующего требованиям к персоналу по ГОСТ ISO 7218-2015 (раздел 4).

7 Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы

8 Отбор проб

Отбор проб в соответствии ГОСТ ISO 7218-2015 (подраздел 8.1) и с нормативными документами на анализируемые продукты.

9 Подготовка проб

10 Разбавители

10.1 Основные материалы

Для улучшения воспроизводимости результатов при приготовлении разбавителя рекомендуется использовать обезвоженные основные компоненты или обезвоженный готовый препарат. Следует строго соблюдать инструкции изготовителя.

Химические реактивы должны быть квалификации х.ч. или ч.д.а. и пригодными для микробиологических исследований.

Используемая вода должна быть дистиллированной или деионизованной.

10.2 Разбавители общего назначения

10.2.1 Пептонно-солевой раствор

10.2.1.2 Приготовление

Компоненты растворяют в воде, подогревая при необходимости.

Доводят значение pH таким образом, чтобы после стерилизации оно было равно 7,0±0,2 при температуре 25°C.

10.2.2 Забуференная пептонная вода

10.2.2.2 Приготовление

Компоненты растворяют в воде, при необходимости подогревая.

Доводят значение pH таким образом, чтобы после стерилизации оно было равно 7,0±0,2 при температуре 25°C.

10.3 Разбавители для специальных целей

Разбавители для специальных целей указаны в специальном стандарте, подходящем к анализируемому продукту.

11 Проведение разведений

1 В некоторых случаях, особенно для проб, имеющих слишком вязкую или слишком густую исходную консистенцию, может возникнуть необходимость увеличить объем разбавителя. Этот объем необходимо учитывать в расчете для последующих операций и/или при выражении результатов.

Источник

ГОСТ ISO 6887-1-2015
Микробиология пищевой продукции и кормов. Подготовка образцов для испытания, исходной суспензии и десятикратных разведений для микробиологического исследования. Часть 1. Общие правила подготовки исходной суспензии и десятикратных разведений

В стандарте изложены общие правила приготовления исходной суспензии и десятикратных разведений для микробиологических исследований пищевой продукции и кормов. Стандарт не применяется к продукции, указанной в ISO 6887-2.

Стандарт идентичен международному стандарту ISO 6887-1:1999 Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination — Part 1: General rules for the preparation of the initial suspension and decimal dilutions (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 1. Общие правила приготовления исходной суспензии и десятичных разведений).

Оглавление

1 Область применения

2 Нормативные ссылки

3 Термины и определения

6 Оборудование и лабораторная посуда

8 Подготовка образца для испытания

9 Методика проведения испытания

Приложение Д.А (справочное) Сведения о соответствии межгосударственного стандарта ссылочному международному стандарту

Организации:

Microbiology of food and animal feeding stuffs. Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination.\rPart 1. General rules for the preparation of the initial suspension and decimal dilutions

Чтобы бесплатно скачать этот документ в формате PDF, поддержите наш сайт и нажмите кнопку:

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ

МИКРОБИОЛОГИЯ ПИЩЕВОЙ ПРОДУКЦИИ И КОРМОВ

Подготовка образцов для испытания, исходной суспензии и десятикратных разведений для микробиологического исследования Часть 1

Общие правила подготовки исходной суспензии и десятикратных разведений

М1КРАБ1ЯЛОГ1Я ХАРЧОВАЙ ПРАДУКЦЫ11 КАРМОУ

Падрыхтоука узорау для выпрабавання, зыходнай суспензМ i дзесящразовых разбауленняу для м1краб1ялапчнага даследавання

Агульныя прав1лы падрыхтоую зыходнай суспензМ i дзесящразовых разбауленняу

Г осстандарт Минск

Предисловие

Евразийский совет по стандартизации, метрологии и сертификации (ЕАСС) представляет собой региональное объединение национальных органов по стандартизации государств, входящих в Содружество Независимых Государств. В дальнейшем возможно вступление в ЕАСС национальных органов по стандартизации других государств.

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены».

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН научно-производственным республиканским унитарным предприятием «Белорусский государственный институт стандартизации и сертификации» (БелГИСС)

2 ВНЕСЕН Госстандартом Республики Беларусь

3 ПРИНЯТ Евразийским советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол 75-П от 27 февраля 2015 г.)

За принятие стандарта проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ISO 3166) 004—97

Код страны по МК (ISO 3166) 004—97

Сокращенное наименование национального органа по стандартизации

Минэкономики Республики Армения

Госстандарт Республики Беларусь

4 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 6887-1:1999 Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination — Part 1: General rules for the preparation of the initial suspension and decimal dilutions (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 1. Общие правила приготовления исходной суспензии и десятичных разведений).

Международный стандарт разработан техническим комитетом по стандартизации ЮОЯС 34 «Пищевые продукты» Международной организации по стандартизации (ISO).

Перевод с английского языка (еп).

Официальные экземпляры международного стандарта, на основе которого подготовлен настоящий межгосударственный стандарт, и международного стандарта, на который даны ссылки, имеются в Госстандарте Республики Беларусь.

В разделе «Нормативные ссылки» и тексте стандарта ссылки на международный стандарт актуализированы.

В стандарт внесено следующее редакционное изменение: наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования международного стандарта в целях увязки с существующей группой межгосударственных стандартов.

Сведения о соответствии межгосударственного стандарта ссылочному международному стандарту приведены в дополнительном приложении Д.А.

Степень соответствия — идентичная (ЮТ)

Настоящий стандарт не может быть воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Госстандарта Республики Беларусь

ГОСТ ISO 6887-1-2015

5 ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ постановлением Госстандарта Республики Беларусь от 25 мая 2015 г. № 29 непосредственно в качестве государственного стандарта Республики Беларусь с 1 марта 2016 г.

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных (государственных) стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных (государственных) органов по стандартизации.

ГОСТ ISO 6887-1-2015

_ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ_

МИКРОБИОЛОГИЯ ПИЩЕВОЙ ПРОДУКЦИИ И КОРМОВ Подготовка образцов для испытания, исходной суспензии и десятикратных разведений для микробиологического исследования

Часть 1

Общие правила подготовки исходной суспензии и десятикратных разведений

М1КРАБ1ЯЛОГ1Я ХАРЧОВАЙ ПРАДУКЦЫ11 КАРМОУ Падрыхтоука узорау для выпрабавання, зыходнай суспензи i дзесяц1разовых разбауленняу для м1краб1ялапчнага даследавання

Частка 1

Агульныя правшы падрыхтоум зыходнай суспензМ i дзесяц1разовых разбауленняу

Microbiology of food and animal feeding stuffs Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination Part 1

General rules for the preparation of the initial suspension and decimal dilutions

Дата введения — 2016-03-01

1 Область применения

В настоящем стандарте изложены общие правила приготовления исходной суспензии и десятикратных разведений для микробиологических исследований пищевой продукции и кормов.

Настоящий стандарт не применяется к продукции, указанной в ISO 6887-2.

2 Нормативные ссылки

Для применения настоящего стандарта необходим следующий ссылочный стандарт. Для недатированных ссылок применяют последнее издание ссылочного стандарта (включая все его изменения).

ISO 7218:2007 Microbiology of food and animal feeding stuffs. General requirements and guidance for microbiological examinations (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям)

3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

3.1 исходная суспензия (первичное разведение) (initial suspension (primary dilution)): Суспензия, раствор или эмульсия, полученные после смешивания взвешенного или отмеренного количества испытуемой продукции (или образца для испытания, отобранного из продукции) с девятикратным количеством разбавителя, позволяющим оседать крупным частицам, если они имеются.

Примечание — См. раздел 5 и примечания 1,2 к9.1.

3.2 последовательные десятикратные разведения (further decimal dilutions): Суспензии или растворы, полученные посредством смешивания отмеренного объема исходной суспензии (3.1) с девятикратным объемом разбавителя и повторения этой операции с дальнейшими разведениями до получения серии десятикратных разведений, пригодных для инокуляции питательной среды.

3.3 соответствующий стандарт (specific standard): Стандарт или руководящий документ, описывающий исследование конкретной продукции (или группы продукции) с целью обнаружения или подсчета определенного микроорганизма (или группы микроорганизмов).

4 Сущность метода

Приготавливают исходную суспензию (3.1) таким образом, чтобы получить однородное распределение микроорганизмов, содержащихся в пробе для испытания.

При необходимости осуществляют десятикратные разведения (3.2) с целью снижения количества микроорганизмов на единицу объема, позволяющих после инкубации наблюдать за тем, растут они или нет (в случае использования пробирок или колб), или подсчитывать колонии (в случае использования чашек), как указано в соответствующем стандарте.

Примечание — Для того чтобы ограничить диапазон подсчета до заданного интервала или если предполагается наличие большого количества микроорганизмов, можно инокулировать только необходимые десятикратные разведения (не менее двух последовательных разведений), требующиеся для выполнения подсчета в соответствии с расчетом, указанным в ISO 7218.

5 Разбавители

5.1 Основные материалы

Для повышения воспроизводимости результатов испытаний рекомендуется при приготовлении разбавителя использовать обезвоженные (сухие) основные компоненты или обезвоженную (сухую) полноценную среду. Необходимо неукоснительно следовать инструкциям изготовителей.

Химические реактивы должны быть признанного аналитического качества и пригодными для микробиологических исследований.

Используют дистиллированную воду или воду равноценного качества (см. ISO 7218).

5.2 Общие разбавители

5.2.1 Пептонный солевой раствор

Гидролизат казеина, г 1,0

Хлорид натрия, г 8,5

Растворяют компоненты в воде, нагревая при необходимости.

5.2.2 Забуференная пептонная вода

Хлорид натрия, г 5,0

Двузамещенный фосфорнокислый натрий 12-водный (Na₂HP0₄-l2H₂0), г 9,0

Однозамещенный фосфорнокислый калий (КН₂Р0₄), г 1,5

Растворяют компоненты в воде, нагревая при необходимости.

Если необходимо, регулируют pH так, чтобы после стерилизации он составлял 7,0 ± 0,2 при тем

Если необходимо, регулируют pH так, чтобы после стерилизации он составлял 7,0 ± 0,2 при температуре 25 °С.

5.3 Разбавители для специального применения

См. стандарт, относящийся к рассматриваемому продукту.

Примечание — Соответствующие правила приведены в ISO 6887-2.

5.4 Розлив и стерилизация разбавителя

Разливают разбавитель (5.2 или 5.3) в объемах, необходимых для приготовления исходных суспензий, по колбам (6.4) соответствующей вместимости.

ГОСТ ISO 6887-1-2015

Разливают разбавитель (5.2 или 5.3) в объемах, необходимых для приготовления десятикратных разведений, в пробирки (6.5) или колбы (6.4) в таких количествах, чтобы после стерилизации в каждой пробирке или колбе содержалось 9,0 мл. Погрешность измерения окончательного объема после стерилизации не должна превышать ±2 %.

Примечание — Если требуется провести подсчет нескольких групп микроорганизмов, используя различную питательную среду, то может возникнуть необходимость розлива всех разбавителей (или некоторых из них) в количествах выше 9,0 мл; в данном случае должен быть оговорен размер колб (6.4) и пробирок (6.5).

Пробирки или колбы закрывают пробками.

Стерилизацию производят в автоклаве при температуре 121 °С в течение 15 мин.

6 Оборудование и лабораторная посуда

Используют стандартное микробиологическое лабораторное оборудование (см. ISO 7218), в том числе перечисленное ниже.

6.1 Оборудование для суховоздушной стерилизации (сушильный шкаф) и стерилизации паром (автоклав).

6.3 Механическая мешалка.

6.4 Колбы или бутылки с закручивающимися крышками.

6.5 Пробирки соответствующей вместимости.

6.6 Полностью нагнетательные градуированные пипетки вместимостью 1, 10 мл с делениями по 0,1, 0,5 мл соответственно.

6.7 Прибор для измерения pH, способный считывать показания с точностью до 0,01 единицы pH при температуре 25 °С, и производить измерения с точностью до ±0,1 единиц pH.

6.8 Весы, с точностью взвешивания до 0,01 г.

7 Отбор образцов

Выполняют отбор образцов в соответствии с требованиями соответствующего стандарта на конкретную продукцию. В случае если такие стандарты отсутствуют, отбор образцов необходимо осуществлять, учитывая мнения всех заинтересованных сторон.

8 Подготовка образца для испытания

См. соответствующий стандарт на конкретную продукцию. В случае если такие стандарты отсутствуют, подготовку образцов необходимо осуществлять, учитывая мнения всех заинтересованных сторон.

9 Методика проведения испытания

9.1 Проба для испытания и исходная суспензия (первичное разведение)

Репрезентативную часть образца для испытания (см. раздел 8) взвешивают в стерильный тигель или стерильный полиэтиленовый пакет с погрешностью измерения массы т в граммах ±5 %, или отмеряют с погрешностью измерения объема V в миллилитрах ±5 %. Если не установлено иное, масса (объем) пробы образца для испытания должна (должен) быть не менее 10 г (10 мл).

Добавляют количество разбавителя, равное 9 * т или 9 к V. Это количество взвешивают (по массе) или отмеряют (по объему) с погрешностью измерения ±5 %.

Примечание 1 — Для продукции, у которой исходная суспензия слишком тягучая или густая, можно добавить дополнительное количество разбавителя, что следует учитывать для последующих операций и/или при выражении результатов. 1

Чтобы избежать разрушения микроорганизмов в результате внезапных изменений температуры, температура разбавителя во время операций, описанных ниже, должна быть приблизительно такой же, как и температура окружающей среды, если иное не указано в соответствующем стандарте.

Смесь гомогенизируют в соответствии с рекомендациями ISO 7218.

Дают крупным частицам осесть при необходимости в течение 15 мин. Можно использовать системы фильтрации, дающие аналогичные результаты.

Для подсчета спор проводят тепловую обработку исходной суспензии в течение 10 мин при температуре 80 °С сразу же после приготовления, после чего осуществляют быстрое охлаждение.

9.2 Последовательные десятикратные разведения

С помощью пипетки переносят 1 мл исходной суспензии с погрешностью измерения 2) ±5 % в пробирку, в которой содержится 9 мл стерильного разбавителя при соответствующей температуре.

Примечание — Допускается в пробирку, содержащую девятикратный объем стерильного разбавителя, добавить более 1 мл исходной суспензии с погрешностью измерения ±5 %.

Для оптимальной точности пипетку вводят в исходную суспензию не более чем на 1 см.

Избегают какого-либо соприкосновения пипетки, содержащей инокулят, со стерильным разбавителем.

Если необходимо, повторяют операцию, используя разведение 10

2 3 и т. д. до получения соответствующего количества микроорганизмов (см. раздел 4).

9.3 Продолжительность процедуры

Между окончанием приготовления исходной суспензии и внесением ее в питательную среду не должно проходить более 45 мин, между приготовлением исходной суспензии (9.1) и началом приготовления следующих десятикратных разведений — более 30 мин, если в соответствующем стандарте не указано иное.

Примечание — Если температура воздуха в лаборатории слишком высокая, необходимо сократить вышеуказанное время.

Приложение Д.А (справочное)

Сведения о соответствии межгосударственного стандарта ссылочному международному стандарту 4

Обозначение и наименование международного стандарта

Обозначение и наименование межгосударственного стандарта

ISO 7218:2007 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям

ГОСТ ISO 7218-2011 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям

УДК 579.67.088.1 (083.74)(476) МКС 07.100.30 ЮТ

Ключевые слова: микробиология, пищевая продукция, исходная суспензия, десятикратные разведения, корма

Ответственный за выпуск Н. А. Баранов

Сдано в набор 26.02.2016. Подписано в печать 29.02.2016. Формат бумаги 60×84/8. Бумага офсетная. Гарнитура Arial. Печать ризографическая. Уел. печ. л. 1,51 Уч.-изд. л. 0,38 Тираж2экз. Заказ 473

Издатель и полиграфическое исполнение:

Научно-производственное республиканское унитарное предприятие «Белорусский государственный институт стандартизации и сертификации» (БелГИСС) Свидетельство о государственной регистрации издателя, изготовителя, распространителя печатных изданий

№ 1/303 от 22.04.2014 ул. Мележа, 3, коми. 406, 220113, Минск.

11 В этом случае объем используемого разбавителя указывают в протоколе испытания.

2> Погрешность измерения ±5 % учитывает значения погрешности используемых пипеток.

Источник