Хроматин зернистый что значит

Хроматин зернистый что значит

При подозрении на новообразование у гинекологических больных наиболее часто приходится встречаться с такими заболеваниями, как дисплазия эпителия, рак in situ шейки матки, гиперплазия эндометрия и рак.

При диспластических процессах эпителиальные клетки могут обнаруживать самые различные признаки дифференцировки, подобные тем, которые встречаются в нормально созревающем плоском эпителии. Встречаются некоторые особенности в строении ядра, которое увеличено в размерах, гиперхромно, с грубым и неравномерно распределенным хроматином. Цитоплазма слабо базофильна, наблюдают ее вакуолизацию. В зависимости от степени дисплазии (слабая, средняя, сильная), клетки обнаруживают различную выраженность полиморфизма. При слабой степени дисплазии чаще встречаются клетки поверхностного и промежуточного слоя. При сильной степени — перечисленные изменения происходят в парабазальных, реже — в промежуточных клетках и бывают резко выражены.

При эпидермоидном раке in situ клетки плоского эпителия находятся на различных стадиях дифференцировки. В них имеются признаки атипии как в ядре, так и в цитоплазме увеличение ядерно-цитоплазмеииого соотношения, гиперхроматоз, грубоглыбчатое строение хроматина, дву- и многоядерность. В цитоплазме — неравномерность окраски и наличие вакуолей.

Инвазивный эпидермоидный рак бывает двух типов. При ороговевающем раке встречаются относительно большие клетки хвостатой или удлиненной формы, хроматин ядер грубый, глыбчатый, в них значительно выражены дегенеративные изменения, ядрышки почти не определяются. Цитоплазма, чаше эозинофильная, большим ободком окружает ядро.

При неороговевающем раке клетки располагаются как в виде комплексов, так и изолированно. Клетки крупных (крупиоклеточный вариант) н мелких размеров, ядра в большинстве клеток тоже крупные. В мелких клетках соотношение ядра и цитоплазмы увеличено в сторону ядра, строение хроматина грубозернистое, просматриваются ядрышки.

При гиперплазии эндометрия цитологическая картина во многом зависит от степени выраженности клеточной атипии. Чаше в препаратах встречаются клетки цилиндрического эпителия с крупными гнперхромными ядрами, в цитоплазме большое количество вакуолей. В более тяжелых случаях цитологическая картина напоминает зрелую адеиокарциному.

В мазках при аденокарциноме эндометрия клетки располагаются как группами, так и разрозненно. Клетки крупных размеров, ядра круглые или овальные, строение хроматина глыбчатое, гиперхромия выражена умеренно, в большинстве клеток определяются ядрышки. Цитоплазма преимущественно гомогенная, часто содержит крупные вакуоли. Чем менее дифференцирована опухоль, тем значительнее выражены все признаки атипии.

При диагностике заболеваний молочной железы изучают выделения из соска и пунктата пальпируемых образований и выявленных при маммографии и термографии непальпируемых образований.

Предопухолевые заболевания (дисгормоиальиая гиперплазия — мастопатия, фиброаденома) характеризуются наличием в пунктатах эпителия протоков и альвеол. При незначительной и умеренно выраженной пролиферации эпителия клеточные элементы однотипны, небольших размеров, с отчетливыми границами. Ядра относительно небольшие; хроматин распределен равномерно; характерно правильное расположение клеток в структурах. По мере нарастания процессов пролиферации появляются клетки с признаками незрелости, последние более крупных размеров, с неровными контурами и неравномерным распределением хроматина. Собственно предраковая пролиферация характеризуется еще большими качественными изменениями эпителия; обнаруживаются отдельные крупные клетки с выраженными признаками атипии

Цитологическая картина рака молочной железы разнообразна в зависимости от морфологических особенностей клеток опухоли. В большинстве случаев клетки обладают рядом характерных морфологических признаков, присущих злокачественной опухоли и позволяющих отличить их от клеточных элементов дисгормональных гиперплазии. К этим признакам относятся крупные размеры клеток, беспорядочное их расположение, грубодисперсный характер хроматина, неправильность очертаний ядер, наличие гипертрофированных нуклеол и дегенеративных изменений (в виде вакуолизации), различные включения в цитоплазме. Трудны для цитологической диагностики мелкоклеточный скиррозный рак и рак с высокой степенью дифференцировки клеток.

Источник

Цитология шм

Добрый вечер! Помогите, пожалуйста, расшифровать результаты цитологии: В препарате обнаружены клетки плоского эпителия промежуточного и поверхностного слоев с реактивными изменениями части клеток. Скопления цилиндрического эпителия с реактивными изменениями, в части клеток дегенеративно-дистрофические изменения. Участки из метаплазированных клеток с репаративными изменениями, ядра округлые, хроматин распределен равномерно, цитоплазма плотная, гомогенная.
Воспалительный компонент. Паракератоз в части клеток.
Клеток с признаками интраэпителиальных изменений и признаками злокачественности в пределах исследуемого материала не найдены. Лейкоцитарная реакция умеренно-выраженная. Специфический инфекционный агент не выявлен. Цитограмма соответствует воспалительному процессу слизистой оболочки (NILM). Эту цитологию сдавала 2 февраля, а до этого брали так же цитологию 30 числа( она получше по результатам). Может ли повлиять повреждение слизистой на результат второй цитологии после проведения первой?
Мазок на флору с небольшим повышением лейкоцитов, посев на флору : обнаружен рост нормофлоры

На сервисе СпросиВрача доступна консультация гинеколога онлайн по любой волнующей Вас проблеме. Врачи-эксперты оказывают консультации круглосуточно и бесплатно. Задайте свой вопрос и получите ответ сразу же!

Светлана, врачи никогда не осмотре не говорили ничего про такое..говорили, что все хорошо. Кольпоскопию не делали, только осмотр со стеклом был и забор мазков) на данный момент ничего не беспокоит, месяц назад только выделения были и зуд(ставила свечи пимафуцин)
Просто мне один гинеколог брал цитологию 30 числа, и второй гинеколог тоже взял, но 2 числа
Первая цитология была лучше, может стоит опираться на ее результаты?

Так же результат NILM. Состою шейки матки: в препарате обнаружены скопления из клеток плоского эпителия поверхностных слоев с пикнотичными ядрами, обильной цитоплазмой и промежуточных слоев с овальными ядрами, контуры ровные, хроматин зернистый, распределён равномерно. Клетки с прищепками атипии не обнаружены. Соскоб с цервикального канала: в препарате обнаружены клетки цилиндрического эпителия обычного строения, расположенных разрозненно и скоплениями, с овальными ядрами, контуры ровные, хроматин зернистый, распределён равномерно. Единичные группы метаплазированного эпителия без патологии. Плоский эпителий поверхностных слоев с пикнотичными ядрами, обильной цитоплазмой и промежуточных слоев с овальными ядрами, контуры ровные, хроматин зернистый, распределён равномерно. Клетки с признаками интраэпиталиальных изменений и злокачественности не обнаружено. Лейкоцитарная реакция незначительная

Ольга, здравствуйте! Просто мне один гинеколог брал цитологию 30 числа, и второй гинеколог тоже взял, но 2 числа
Первая цитология была лучше, может стоит опираться на ее результаты?

Так же результат NILM. Состою шейки матки: в препарате обнаружены скопления из клеток плоского эпителия поверхностных слоев с пикнотичными ядрами, обильной цитоплазмой и промежуточных слоев с овальными ядрами, контуры ровные, хроматин зернистый, распределён равномерно. Клетки с прищепками атипии не обнаружены. Соскоб с цервикального канала: в препарате обнаружены клетки цилиндрического эпителия обычного строения, расположенных разрозненно и скоплениями, с овальными ядрами, контуры ровные, хроматин зернистый, распределён равномерно. Единичные группы метаплазированного эпителия без патологии. Плоский эпителий поверхностных слоев с пикнотичными ядрами, обильной цитоплазмой и промежуточных слоев с овальными ядрами, контуры ровные, хроматин зернистый, распределён равномерно. Клетки с признаками интраэпиталиальных изменений и злокачественности не обнаружено. Лейкоцитарная реакция незначительная

Источник

анализ цитология

Задайте вопрос и получите качественную консультацию врачей. Для вашего удобства консультации доступны и в мобильном приложении. Не забывайте благодарить врачей, которые вам помогли! На портале действует акция «Поблагодарить – это просто»!

Вы врач и хотите консультировать на портале? Ознакомьтесь с инструкцией «Как стать консультантом».

Уважаемые консультанты, обратите внимание, что давать назначения или прямые указания по применению препаратов задающим вопросы – запрещено! Пожалуйста, ознакомьтесь с правилами работы консультантов на нашем портале.

Для вас всегда работает специальный раздел для нашего совместного общения и публикации новостей о работе раздела консультаций. Уделите ему внимание и посещайте время от времени. Там будут публиковаться все новости о доработках раздела и его формате работы – где вы можете задать любые интересующие вас вопросы.

Для экстренной связи с администрацией портала используйте нашу почту: mlab@medihost.ru

Спасибо за то, что вы с нами!

—> Мы открыли специальный раздел для нашего совместного общения и публикации новостей о работе раздела консультаций.Уделите ему внимание и посещайте время от времени. Там будут публиковаться все новости о доработках раздела и его формате работы.

—> В ближайшее время мы планируем большое обновление функционала выплаты бонусов для консультантов портала. Информация по этому обновлению так же будет опубликована на форуме в соотвествующем разделе. Ждите новостей!

—> Мы так же призываем использовать этот раздел форума для общения с нами по любым вопросам.

—> Уважаемые консультанты, обратите внимание, что давать назначения или прямые указания по применению препаратов задающим вопросы – запрещено! Пожалуйста, ознакомьтесь с правилами работы консультантов на нашем портале.

—> Для вас всегда работает специальный раздел для нашего совместного общения и публикации новостей о работе раздела консультаций. Уделите ему внимание и посещайте время от времени. Там будут публиковаться все новости о доработках раздела и его формате работы – где вы можете задать любые интересующие вас вопросы.

—> Для экстренной связи с администрацией портала используйте нашу почту: mlab@medihost.ru

—> Спасибо за то, что вы с нами!

—> Не занимайтесь самолечением. Только ответственный подход и консультация с медицинским специалистом поможет избежать негативных последствий самолечения. Вся информация, размещенная на портале Medihost, носит ознакомительный характер и не может заменить собой посещение врача. В случае возникновения каких-либо симптомов заболевания или недомогания следует обратиться к врачу в медицинское учреждение.

—> Подбор и назначение лекарственных препаратов может только медицинский работник. Показания к применению и дозировку лекарственных веществ необходимо согласовывать с лечащим врачом.

—> Медицинский портал Medihost является информационным ресурсом и содержит исключительно справочную информацию. Материалы о различных заболеваниях и способах лечения не могут использоваться пациентами для самовольного изменения плана лечения и назначений врача.

—> Администрация портала не берет на себя ответственности за материальный ущерб, а также ущерб здоровью нанесенный в результате использования информации, размещенной на сайте Medihost.

Источник

Путешествие внутрь клеточного ядра, или Системная биология хроматина

Путешествие внутрь клеточного ядра, или Системная биология хроматина

За последние десятилетия наука о хроматине из чисто описательной цитологической дисциплины превратилась в область системной биологии, активно использующую высокопроизводительное секвенирование для реконструкции пространственной организации генетической «начинки» клеточного ядра.

Автор

Редакторы

Развитие технологий высокопроизводительного секвенирования позволило изучить структуру хроматина на ранее невиданном для клеточных биологов уровне — на уровне взаимодействий отдельных участков генома! Четвертая статья цикла «Пятерка по системной биологии» расскажет, как устроена современная наука о хроматине. Проекты стипендиатов посвящены как фундаментальным аспектам динамики хроматина и внутрихроматиновых взаимодействий, так и изучению организации хроматина с помощью высокопроизводительных методов у разных живых организмов.

Пятерка по системной биологии

Победителями Стипендиальной программы по системной, клеточной и молекулярной биологии, организованной российскими аффилированными лицами компании «Филип Моррис Интернэшнл» (ФМИ) на базе Центра наук о жизни Сколковского института науки и технологий, ежегодно становятся пять молодых ученых до 35 лет. Знания по своим темам у стипендиатов, без сомнения, также заслуживают «пятерки» — поэтому спецпроект и получил такое название.

В статьях цикла наши авторы пообщаются со стипендиатами разных лет, профессорами и преподавателями Сколтеха, а также с представителями ФМИ.

Партнер спецпроекта — российские аффилированные лица компании «Филип Моррис Интернэшнл» (ФМИ), которая активно ведет исследования в области биомедицины, системной биологии и биотехнологий.

Наука о хроматине: вчера, сегодня, завтра

Под термином «хроматин» понимают комплекс геномной ДНК и белков, в виде которого генетический материал упакован в ядре эукариотической клетки (впрочем, сложная упаковка генома присуща не только эукариотам, а, например, еще и археям [2]). Этот термин в 1879 году предложил немецкий цитолог Вальтер Флемминг. Он изучал митоз с помощью светового микроскопа [3] и обнаружил, что в определенный момент в ядре клетки появляются легко визуализируемые нитевидные структуры. Сам Флемминг считал, что введенный им термин надолго не закрепится: «Слово “хроматин” будет существовать, пока его химическая природа остается неизвестной. Пока же им следует обозначать нитевидные, легко окрашиваемые структуры в ядре делящейся клетки [4]».

Вряд ли Флемминг мог предположить, что через более чем сто лет слово «хроматин» не только не исчезнет из словаря клеточной и молекулярной биологии, но и будет регулярно появляться в заголовках статей ведущих научных журналов, а сама наука о хроматине из области цитогенетики вырастет в динамично развивающееся междисциплинарное направление на стыке биологии, химии и информатики.

Но давайте обо всем по порядку.

Бурное изучение химической природы ДНК, начавшееся в первой половине XX века и завершившееся триумфальным открытием структуры ДНК Уотсоном и Криком, положило начало новой главе в изучении хроматина. В 1960-х годах биологи занялись исследованием белковой составляющей хроматина, а также его эпигенетических модификаций (подробнее об эпигенетике читайте в нашей статье «Эпигенетика: невидимый командир генома» [5]).

Однако несмотря на все успехи «охотников за хроматином», в те годы всё еще не было убедительного ответа на «детский» вопрос: как длинная, очень длинная молекула ДНК (у человека длиной 2 м в каждой клетке) умещается в крошечном пространстве клеточного ядра?

Подробнее об истории развитий представлений об организации хроматина, интервью с Леонидом Мирным из Массачусетского технологического института (о нем тоже идет речь в тексте) и о том, что сейчас известно о пространственной организации генома, читайте в нашей статье «Организовать геном: запутанная история гипотез и экспериментов» [6].

Во второй половине XX века специалисты по электронной микроскопии всерьез занялись изучением пространственной организации хроматина в клеточном ядре и достигли в этом существенных успехов. Так, в 1974 году была описана нуклеосома — «диск» из восьми молекул гистонов, на который намотана ДНК длиной примерно 200 пар оснований [7].

Однако попытки идентифицировать с помощью электронной микроскопии в хроматине структуры более высокого порядка дали неоднозначные результаты. Дело в том, что пробоподготовка препаратов для электронной микроскопии приводит к появлению множества артефактов, поэтому ряда структурных элементов хроматина, визуализируемых с помощью электронного микроскопа, в действительности в живой клетке просто нет.

Принципиально новая глава в изучении хроматина открылась на рубеже XX–XXI веков в связи с развитием методов высокопроизводительного секвенирования хроматина. Благодаря приходу биоинформатики в классическую цитологию биологи получили беспрецедентную возможность изучать пространственную организацию хроматина в живой клетке на уровне взаимодействий отдельных участков генома! Новые методы изучения организации хроматина, которые называют C-методами по названию первого разработанного из них — Chromosome Conformation Capture, — основываются на идее, что фрагменты генома, контактирующие друг с другом и, следовательно, располагающиеся рядом, можно сшить в одну молекулу ДНК, которую далее можно отсеквенировать [8] и узнать последовательности взаимодействующих участков.

Один из самых популярных методов для изучения пространственной организации хроматина — Hi-C (подробнее о нем см. во врезке ниже). Он позволяет изучать на полногеномном уровне взаимодействия различных участков генома.

Рисунок 1. Екатерина Храмеева, кандидат биологических наук, старший преподаватель Сколтеха

«Перелом случился с изобретением метода Hi-C в 2009 году, — рассказывает “Биомолекуле” Екатерина Храмеева, стипендиат 2016 года, которая, кстати, сейчас принимает участие в оценивании заявок на стипендию (рис. 1). — Статья с описанием метода Hi-C, вышедшая в Science [9], насчитывает около 3000 цитирований, что очень много. Hi-C — это, возможно, один из самых сложных протоколов в молекулярной биологии, в основном из-за своей многоступенчатости. Каждый отдельный шаг не вызывает запредельных трудностей, но все их нужно выполнить очень аккуратно и не допустить ошибки. И, главное, если всё же допущена ошибка на каком-то из этапов, об этом становится известно только в самом конце пути, когда потрачено много времени и денег на реактивы и секвенирование. Из-за таких трудностей на заре становления метода эксперименты Hi-C умели делать считанные лаборатории в мире (наши коллабораторы — лаборатория Сергея Владимировича Разина в Институте биологии гена РАН — была одной из них), но теперь Hi-C научились делать многие группы, и публикации о хроматине без Hi-C-данных — редкость.

«Биомолекула» опубликовала интереснейшую статью, повествующую о становлении нового подхода к изучению клеточного ядра «из первых рук»: «Новый взгляд на геном: не просто цепочка генов, а трехмерная сеть, интегрирующая функциональные домены ядра» [10]. Ее автор, Сергей Владимирович Разин, стал одним из основателей новой науки о хроматине и пионером этой области в России. Результаты, полученные его лабораторией, неоднократно публиковались в ведущих научных журналах, в частности, в 2017 году Nature опубликовал их исследование, посвященное реорганизации хроматина ооцита после оплодотворения [11], [12]. — прим. автора статьи.

Интересно, что ключевым прорывом стало именно использование высокопроизводительного секвенирования. Методы, похожие на Hi-C, были известны и до 2009 года, но они позволяли расшифровать укладку хроматина только на небольшой части генома, из-за чего их применимость была ограничена. Hi-C же впервые позволил получить полногеномную карту упаковки хроматина в ядре, причем очень точную. Такая карта — это очень большой объем информации, что называется, “большие данные”: огромная матрица, весь геном против всего генома. Поэтому сразу возникла необходимость в разработке новых вычислительных, биоинформатических методов для анализа этих данных, т.к. никакие из существующих не годились. Леонид Мирный и Максим Имакаев из Массачусетского технологического института были пионерами в этом направлении, потом другие группы подключились, в том числе и наша».

Метод Hi-C — основа изучения организации хроматина

Hi-C (рис. 2) выглядит следующим образом. Сначала клетки фиксируют формальдегидом, при этом между взаимодействующими участками хроматина образуются кросс-сшивки. Далее с ДНК удаляют гистоны, которые не были сшиты с другими белковыми молекулами при фиксации, и очищенную ДНК, связанную через гистоны в местах контактов, обрабатывают рестриктазой. При этом образуются липкие концы, которые достраивают, включая в состав фрагментов нуклеотиды, меченные биотином. После этого образуются комплексы, состоящие из двух молекул ДНК, соответствующих взаимодействующим участкам генома и меченных биотином, которые ковалентно связаны с одними и теми же гистонами, которые в клетке покрывали взаимодействующие участки генома. Теперь фрагменты генома, которые в клетке находились в непосредственном контакте, можно с помощью процедуры лигирования (то есть сшивания) объединить в одну молекулу и за счет биотина, включенного в состав фрагментов, отобрать из клеточного экстракта при помощи белка стрептавидина, обладающего очень высоким сродством к биотину. В результате получается библиотека молекул ДНК, каждая из которых состоит из двух ковалентно сшитых друг с другом участков генома, которые взаимодействовали друг с другом в клетке.

Рисунок 2. Принцип метода Hi-C. Конфигурацию хроматиновой фибриллы в ядре фиксируют формальдегидом. После экстракции непришитых гистонов ДНК разрезают рестриктазой и застраивают липкие концы с использованием биотинилированного предшественника. Далее проводят лигирование. Сшитые фрагменты выделяют посредством аффинной хроматографии на шариках со стрептавидином, который специфически связывает биотин. Полученный препарат секвенируют и результаты накладывают на референсный геном. Получаемая в итоге «тепловая карта» позволяет судить о частотах контактов между удаленными геномными элементами. На приведенной в секции B тепловой карте красный цвет соответствует наиболее высокой частоте пространственных взаимодействий. Выраженные треугольники на карте свидетельствуют о существовании контактных доменов, внутри которых пространственные взаимодействия наблюдаются намного чаще, чем в хроматине между доменами. Контактные домены обычно отождествляют с хроматиновыми глобулами, хотя убедительные свидетельства в пользу такой интерпретации появились лишь недавно.

После глубокого секвенирования фрагментов и биоинформатической обработки полученных прочтений на выходе получается тепловая карта взаимодействий, на которой отображена частота выявленных взаимодействий между разными участками генома. По каждой из двух осей карты откладывают крупный участок генома (например хромосому), и квадратики, получающиеся при разбиении каждой из осей на участки генома некоторой длины, закрашивают в зависимости от частоты взаимодействия двух участков генома. Такая карта симметрична относительно диагонали, и более ярко окрашенные треугольники на ней соответствуют хроматиновым доменам, которые также называют топологически-ассоциированными. Внутри этих доменов участки хроматина взаимодействуют друг с другом намного чаще, чем за их пределами. Как удалось недавно доказать, хроматиновые домены, выявленные с помощью Hi-C, примерно тождественны хроматиновым глобулам, которые можно обнаружить в живых клетках с помощью микроскопии [13].

Помимо лаборатории Сергея Разина из Институте биологии гена РАН в России есть и другие группы, освоившие метод Hi-C, например, группа Вениамина Фишмана из Новосибирского государственного университета или лаборатория Олега Гусева в Казанском федеральном университете. Лаборатория Екатерины Храмеевой, одного из пионеров новой науки о хроматине в России, анализирует экспериментальные данные Hi-C, поставляемые учеными из ИБГ РАН.

«Сейчас ведутся попытки разработать новый метод, лучше Hi-C, — продолжает Екатерина. — Но пока появляются только улучшенные версии Hi-C с небольшими модификациями, повышающими качество данных на выходе. В целом, развитие идет скорее количественно. В последние годы публикуется всё больше и больше данных Hi-C в разных модельных системах и организмах, так как метод стал более доступным, да и секвенирование упало в цене. А для Hi-C это особенно важно: стоимость секвенирования для Hi-C примерно равна квадрату стоимости секвенирования для любого другого типа эксперимента, поскольку на выходе получаются двумерные данные в виде матрицы, а не одномерные, как для измерения экспрессии генов, например. Работ публикуется много, но мне кажется, что анализ данных не всегда поспевает за их производством: часто снимают только “сливки”, хотя еще столько интересного можно было исследовать!»

На вопрос о потенциальном практическом применении знаний о хроматине, полученных с помощью высокопроизводительных методов, Екатерина отвечает, что нарушения упаковки хроматина приводят к изменениями в экспрессии генов, и, как следствие, к тяжелым заболеваниям — нарушениям развития и онкологическим болезням: нейробластоме, лейкемии, медуллобластоме, глиоме, раку прямой кишки. Эти онкологические заболевания являются многофакторными и у каждого пациента могут быть вызваны поломками в разных местах генома. Таким образом, изучение всего многообразия нарушения упаковки хроматина необходимо для развития персональной медицины, для разработки новых методов лечения и диагностики.

«Если рассуждать более широко, то изучение хроматина позволит нам лучше понять известные и, возможно, определить новые молекулярные механизмы регуляции экспрессии генов, — считает Екатерина Храмеева. — Здесь особенно полезны знания о взаимосвязи структуры и функции, чем наша лаборатория в основном и занимается. Понимание регуляции экспрессии, в свою очередь, важно для идентификации механизмов развития целого спектра заболеваний. Без расшифровки этих механизмов невозможна разработка новых лекарственных препаратов и подходов к лечению».

Область на стыке клеточной биологии и биоинформатики, занимающуюся изучением пространственной организации хроматина, называют 3D-геномикой. Она позволяет взглянуть на многие биологические процессы с совершенно нового ракурса — изменений организации хроматина. Какие изменения в структуре хроматина можно найти в раковых клетках? Отличаются ли по пространственной организации хроматина клетки разных тканей одного организма или клетки разных биологических видов? Как меняется структура хроматина в клеточном ядре при разнообразных видах стресса? Есть в молодой науке о хроматине и огромный простор для улучшения старых и разработки новых алгоритмов, позволяющих получить как можно более точное представление об организации хроматина в разных типах клеток и разных организмах. «Биомолекула» узнала все подробности об этом из первых рук — от молодых российских исследователей, занимающихся хроматином.

Исследования «Филип Моррис Интернэшнл» по системной токсикологии

Джулия Хёнг (Julia Hoeng), директор по системной токсикологии «Филип Моррис Интернэшнл», рассказала «Биомолекуле», почему для ФМИ представляют интерес работы, связанные с системной биологией хроматина.

Токсикология — это область медицины, изучающая ядовитые вещества. Системная токсикология интегрирует классическую токсикологию и количественный анализ разнообразных и молекулярных изменений, которые происходят в организме под действием ядов, на всех уровнях [14].

К числу этих подходов относится и эпигенетика. Исследователи ФМИ пытаются выяснить, каким образом курение сигарет и других табачных продуктов влияет на эпигеном (совокупность всех эпигенетических меток) человека и, следовательно, экспрессию генов и риск возникновения различных заболеваний.

Оценивая воздействие на организм человека бездымных продуктов с пониженным риском, специалисты ФМИ, помимо прочего, исследуют изменения в метилировании ДНК, модификациях гистонов и доступности хроматина.

Что же касается пространственной организации генома, то ученые ФМИ используют Hi-C прежде всего для сборки геномов растений. Дело в том, что метод Hi-C включает этап глубокого секвенирования с высоким покрытием. Хотя Hi-C и родственные методы позволяют изучать взаимодействия участков генома, в том числе и энхансеров с соответствующими промоторами, а также исследовать транскрипционную активность участков генома, специалисты ФМИ пользуются преимущественно методом иммунопреципитации хроматина с последующим секвенированием (ChIP-seq), поскольку этот метод больше подходит для масштабных токсикологических исследований.

У Джулии Хёнг также есть свое видение будущего 3D-геномики:

— 3D-геномика, особенно на уровне единичных клеток, — это очень молодая область, и для дальнейшего использования в биомедицине и системной токсикологии она должна пройти стандартизацию и оптимизацию. Быстрый прогресс методов высокопроизводительного секвенирования, в частности, развитие технологий длинных прочтений (секвенирование третьего поколения [15]), может привести к существенному повышению чувствительности и точности методов изучения единичных клеток до уровня, сопоставимого с биомедицинскими исследованиями [16], [17].

Как устроен хроматин мыши и дрозофилы

Стипендиат 2018 года: Александра Галицына, аспирант четвертого года Центра наук о жизни Сколковского института науки и технологий.

Название проекта: «Интерпретируемая модель для предсказания вероятности контактов хроматина».

Биология — пожалуй, самая антропоцентричная из всех естественных наук. Подавляющее большинство научных исследований по биологии, не связанных напрямую с изучением биоразнообразия, так или иначе ставят своей целью выяснение определенных деталей функционирования человеческого организма. Даже если непосредственным объектом изучения является мышь или другой живой организм, зачастую ученые пытаются на нем воспроизвести и детально рассмотреть некоторый аспект биологии Homo sapiens или характерный для него биологический процесс, в том числе патологический. Работы, направленные на исследование разнообразных живых организмов на молекулярном уровне, встречаются существенно реже.

Александра Галицына учится в аспирантуре Центра наук о жизни Сколковского института науки и технологий и в рамках стипендиальной программы ФМИ изучает трехмерную организацию хроматина у дрозофилы и мыши и сравнивает ее с таковой у человека (подробнее о Центре наук о жизни Сколтеха читайте в нашей статье «Биологический наукоград: как работает Центр наук о жизни Сколтеха» [18]).

Почему именно мышь и дрозофила? «Дело в том, что для использования методов машинного обучения и, в особенности, нейронных сетей, требуется большая обучающая выборка. Чем больше случайный шум в данных, тем бóльшим должен быть ее размер. Таким образом, я могу выбрать только те организмы, для которых этот шум достаточно низок, а объем полученных данных — достаточно высок. Конечно, что такое “достаточно” — вопрос спорный, но на данный момент под мои критерии подходят только три организма: человек, мышь и дрозофила (рис. 3)», — объясняет Александра. Однако не исключено, что в ближайшее время список организмов, для которых получены данные о трехмерной организации хроматина с подходящим качеством, будет пополняться. По мнению Александры, ближайший кандидат — нематода Caenorhabditis elegans.

«Биомолекула» ранее писала об одном исследовании хроматина дрозофилы, опубликованном лабораториями Екатерины Храмеевой и Сергея Разина [19].

Рисунок 3. Работа Александры Галицыной посвящена изучению и сравнению пространственной организации хроматина у дрозофилы, мыши и человека. Подробности в тексте.

Два важнейших фактора для предсказания пространственной укладки участка генома — это его гуанин-цитозиновый состав и транскрипционная активность, которая тесно связана с открытостью хроматина. Эти два признака определяют, насколько данный участок вообще склонен к взаимодействию с другими участками хроматина. Александра и коллеги смогли найти любопытную закономерность, характерную для хроматина человека и мыши: «Если какой-то локус однажды изменил свое расположение в геноме в ходе эволюции, например, переместился из большой хромосомы общего предка человека и мыши на маленькую или наоборот, его свойства образовывать контакты независимы от локального контекста нового положения, — рассказывает Александра “Биомолекуле”. — Таким образом, мы нашли некоторое общее правило, которое, хотя и одинаково применимо для мыши и человека, но, тем не менее, приводит к различию в структуре хроматина этих двух организмов». Это интересное наблюдение уже опубликовано в журнале PeerJ [20].

С участием Александры также удалось выявить интересные различия между механизмами формирования топологически-ассоциированных доменов у человека и у дрозофилы, на этот раз с помощью применения нейронных сетей. «У млекопитающих за образование хроматиновых доменов в основном отвечают два белка: когезин и CTCF. Согласно одной из основных современных гипотез — модели выпетливания ДНК, — когезин активно формирует петли хроматина и сворачивает ДНК. Однако он не может пройти сквозь расположенные на ДНК барьеры — связанные с ДНК молекулы CTCF, — которые и приводят к образованию границ доменов. Удивительно, но в дрозофиле это не является правилом: CTCF не приводит к столь выраженному образованию границ. Вместо этого действуют другие белковые факторы, в частности, новый потенциальный доминантный инсулятор дрозофилы Chriz. Это удалось показать с помощью применения рекуррентных нейронных сетей, которые учитывают локальный контекст ДНК».

Александра считает, что главной сложностью, с которой она столкнулась во время работы над «хроматиновым» проектом, оказалась нехватка вовсе не научных статей по теме или подходящих исследовательских инструментов, а общения с другими специалистами, исследующими хроматин. «Допустим, я обнаружила новую особенность в трехмерной организации хроматина, но заслуживает ли она внимания? Нашелся хороший метод или способ интерпретации результатов, но достаточно ли его применение обоснованно? Могу ли я сделать напрашивающийся теоретический вывод из моего анализа? На практике все эти вопросы оказываются намного тоньше и сложнее, — признается Александра. — Решение этой проблемы, я бы даже сказала, способ развивать свою мысль, который был хорошо известен и до меня, — это общение с ведущими мировыми специалистами. Часть средств стипендии пошла на то, чтобы такое общение обеспечить. Так, мне удалось рассказать о результатах своих исследований на нескольких конференциях и, благодаря обратной связи международных специалистов, разобраться со многими исследовательскими вопросами и проблемами. Наконец, главной для меня оказалась стажировка в Массачусетском технологическом институте, которая вряд ли случилась бы без поддержки стипендии. Там я познакомилась с последними достижениями теоретической мысли о структуре хроматина, что позволило мне объяснить многие наблюдаемые феномены».

Кстати, у «Биомолекулы» выходит целый цикл статей о модельных организмах, обязательно загляните!

«Что касается немодельных организмов, здесь возможна любая экзотика, — продолжает Александра. — Из примечательного — внушительный американский проект DNA Zoo, в котором с помощью Hi-C собирают геномы и исследуют свойства хроматина десятков видов. Существуют и препринты о хроматине организмов, которые по-настоящему меняют наше представление о возможностях организации хроматина. Например, это работа из лаборатории Йоба Деккера на динофлагелляте Symbiodinium microadriaticum [22]. Хроматин этой водоросли, возможно, находится в кристаллоподобном состоянии, в нем отсутствуют привычные для других организмов компартменты, а домены обладают рядом уникальных и необъяснимых свойств. Думаю, что в этой области в ближайшие годы нас ждут важные открытия и смена ряда гипотез. Наконец, у нас в Сколтехе сейчас занимаются очень любопытным объектом — слизевиком Dictyostelium discoideum. Это одноклеточная амеба, которая в течение своего спороносного цикла претерпевает радикальные изменения поведения и фенотипа и, как мы надеемся, структуры хроматина. Проект выполняется в большой коллаборации, в которой задействованы группы Сергея Владимировича Разина, Михаила Сергеевича Гельфанда и Екатерины Храмеевой из Сколтеха, а также группа Леонида Мирного из Массачусетского технологического института. Я надеюсь, что о подробностях нам удастся рассказать в готовящейся работе».

Александра Галицына о стипендии ФМИ

— Почему вы решили подать заявку на стипендию ФМИ?

Подробнее о проекте Екатерины можно прочесть в первой статье этого спецпроекта — «Инициатива, которая вдохновляет» [24].

— В чем, на ваш взгляд, преимущества стипендии ФМИ по сравнению с другими стипендиями для молодых ученых? Что она дала вам?

— Во-первых, стипендия позволила мне написать одну из первых своих заявок на конкурс. Правила подачи — строгие и близкие к тем заявкам на грант, которые обычно пишут «взрослые» исследователи. Это помогает прощупать почву под ногами: определиться, подойдет ли такой способ работы в дальнейшем. С другой стороны, для человека, желающего развиваться в академической среде, это жизненно необходимый навык. Программа ФМИ ему удачно способствует.

Во-вторых, чтобы податься на стипендию, неизбежно приходится фокусироваться только на одной, самой стоящей гипотезе и продумать детали своих исследований на три года вперед. Распланировать свои действия на такой долгий срок, предусмотрев вероятности провала на каждом этапе — довольно сложная задача, которая меня организовала и, признаться, отрезвила. Важно, что разработанному в заявке плану нужно обязательно следовать. Речь не о том, что нужно заполнить строгий формальный отчет по пунктам: в программе ФМИ отчет проходит в формате написания свободного текста и доклада каждый год. Это здорово: получается как бы «сверять стрелки», целостно формулировать свое продвижение за год. Если ты шел в неверном направлении, то на подобных отчетах и случается осознание и поворот. Я, например, долгое время потратила на разработку своего метода предсказания карт контактов ДНК, в то время как группы-конкуренты успели выпустить около пяти статей по этой теме. Мне стоило воспользоваться их наработками, а не упорно набивать те же шишки — это стало понятно на одном из промежуточных отчетных докладов. На мой взгляд, такой режим способствует развитию в современной научной среде и достижению поставленных целей. Ведь изобилие информации, постоянно выходящих новых результатов исследований, большой шанс отрицательного результата экспериментов — всё это требует от молодого исследователя быть гибким и вовремя переориентировать свой подход.

— Как вы видите свою исследовательскую деятельность после стипендии? Планируете ли вы заниматься тематикой хроматина в дальнейшем?

— Я думаю, что стипендия дала мне уверенность: я готова и могу развивать свои научные идеи, если у меня есть на это ресурсы, а также возможность регулярно обсуждать результаты с научным руководителем, коллегами и получать обратную связь от экспертов стипендиальной программы и других стипендиатов. Я отношусь к годам выполнения проекта как к некоторой репетиции своей дальнейшей «взрослой жизни» в этой области.

Вы тоже можете стать стипендиатом Systems Biology Program!

Если вы — российский биолог, вам не более 35 лет, вы занимаетесь исследованиями в области биологии и имеете не менее двух публикаций в международных рецензируемых журналах с импакт-фактором более 2,0, в том числе одну публикацию с первым или последним авторством, вы можете подать заявку на стипендию Systems Biology Program уже сейчас! Подробная информация и полный список номинаций доступны на официальном сайте стипендиальной программы. Прием заявок продлится до 1 февраля 2021 года. Желаем успеха!

Моделируя хроматин

Стипендиат 2018 года: Павел Кос, младший научный сотрудник кафедры физики полимеров и кристаллов физического факультета МГУ им. М.В. Ломоносова.

Название проекта: «Двунаправленное изучение организации хроматина в клеточном ядре эукариот».

Биологи привыкли рассматривать хроматин как носитель наследственной информации, опуская, что он собой представляет с точки зрения физики. В то же время для изучения пространственной организации хроматина именно свежий взгляд со стороны физики может дать весьма интересные результаты.

Павел Кос, сотрудник кафедры физики полимеров и кристаллов физического факультета МГУ, изучает не только трехмерную конформацию хроматина саму по себе, но и моделирует кинетику ее поведения с помощью физического подхода. «Если говорить грубо, то хроматин является длинной полимерной цепью. О поведении длинных полимерных цепей в физике полимеров известно довольно много (рис. 4). Однако далеко не всегда поведение полимерной системы может быть описано аналитически, и в этом случае используют компьютерное моделирование», — рассказывает Павел «Биомолекуле».

Рисунок 4. Моделируя хроматин, Павел в качестве исходной модели использовал полимерную цепь, представленную в виде шариков на пружине. Длина цепи соответствует хромосоме в масштабе 1 шарик к 10 тысячам пар оснований. Затем, используя экспериментальную информацию о контактах между участками хромосомы в одиночной клетке, группа Павла получила трехмерную структуру хромосомы. Далее исследователи раскрасили ее в соответствии с экспериментальными данными об активности хроматина. Это позволило изучить распределение активного и неактивного хроматина в трехмерном пространстве внутри хромосомной территории в клеточном ядре. Оказалось, что некоторые элементы укладки хроматина повторяются в различных клетках, несмотря на большую межклеточную вариабельность пространственной организации хроматина.

иллюстрация Любови Колосовской по наброску Павла Коса

Павел отмечает, что результаты компьютерного моделирования необходимо подтверждать с помощью экспериментов: «При моделировании изучаемый эффект воспроизводится в идеальном окружении, то есть с использованием выбранного набора факторов. Реальность, как правило, далека от идеального случая».

Экспериментальные результаты, использованные в работе Павла [25], предоставляла лаборатория Сергея Владимировича Разина из ИБГ РАН. «Из экспериментальных данных мы использовали информацию о контактах между разными участками хроматина, а также тип этих участков. Эта информация была перенесена в модель, — объясняет Павел. — При построении модели любой системы мы всегда ориентируемся на теоретические предсказания и экспериментальные эффекты, которые хотелось бы описать. Персистентная длина (жесткость полимерной цепи), параметры взаимодействия между мономерными звеньями и растворителем, а также технические параметры были взяты преимущественно из литературы. В некоторых случаях требовались дополнительные исследования поведения системы в зависимости от конкретного параметра, по результатам которых и выбирались оптимальные значения. В ходе работ было также проведено множество положительных и отрицательных контрольных тестов, чтобы подтвердить выявленные эффекты. Все многочисленные сложные расчеты выполнялись на суперкомпьютере “Ломоносов-2”, для расчета одной системы использовалось 84–140 ядер, а время расчета одной системы составляло до шести суток».

Рассказывая о результатах своей работы в рамках стипендиальной программы ФМИ, Павел отмечает:

«Во-первых, мы разработали мощный инструмент для построения трехмерной архитектуры хроматина в ядре клетки и подтвердили его состоятельность на большом массиве экспериментальных данных. Он позволяет изучать не только статику и кинетику, но также и динамику хроматина. Это очень ценно, так как хроматин подвижен, и многие эффекты невозможно описать без учета этого. Во-вторых, в ходе исследований было установлено, что, несмотря на большую межклеточную вариабельность, ряд мотивов укладки хроматина воспроизводится в отдельных клетках. Иначе говоря, коллективные особенности трехмерной архитектуры проявляются в одиночных клетках. На практике гипотетически результаты моей работы могут позволить выявить место поломки регуляции транскрипции и, как минимум, объяснить причину, а, как максимум, устранить такую поломку. Однако такие рассуждения неизбежно приводят нас к этическим вопросам. Дело в том, что даже при наличии надежного инструмента редактирования генома, неясным остается, до каких пор мы можем его использовать: тяжелые генетические заболевания, легкие заболевания, косметические изменения. Чем меньше необходимость изменений для нормальной жизни, тем больше к ним вопросов».

Павел Кос о стипендии ФМИ

— Почему вы решили отправить заявку на стипендию ФМИ?

— На момент начала проекта я был аспирантом, а теперь являюсь сотрудником кафедры физики полимеров и кристаллов физического факультета МГУ, и область моих научных интересов тесно связана с биологией. Тематика моих исследований подходила под программу, и я захотел попробовать. После первой попытки я получил очень подробную и полезную рецензию на свой проект, доработал его, расширил. Вторая попытка была удачной.

— Что выделяет стипендию ФМИ среди других стипендий для молодых исследователей? Что она дала лично вам?

— Большое количество возможностей в плане получения гранта у молодых исследователей появилось буквально в последние два года. До этого аспиранты и молодые ученые участвовали, как правило, в больших проектах. Это не всегда позволяло работать над интересующими тебя вопросами в полной мере. Стипендия ФМИ позволила мне самостоятельно ставить и решать научную задачу. Собственно, в этом и есть, наверное, главное преимущество этой стипендии: она позволяет работать над интересными тебе задачами, а также получать ценный опыт управления проектом.

Заключение

Что же ждет науку о хроматине в ближайшие несколько лет? «Я вижу большой потенциал в развитии методов анализа, — продолжает делиться с “Биомолекулой” Екатерина Храмеева. — Данных по хроматину уже много и будет еще больше, при этом анализ отстает. Надо думать, что мы дополнительно можем полезного извлечь из этих данных, если копнем глубже и будем более аккуратными в вычислениях. Уверена, что очень многое можно сделать. Мы смотрим в направлении методов машинного обучения, нейронных сетей, пробуем применять их к анализу хроматиновых данных, а также пытаемся переносить математические методы из других областей науки на хроматин [26].

Что касается экспериментальной части, есть мнение, что Hi-C скоро отойдет на второй план, и его заменят принципиально другие методы, основанные на микроскопии. Действительно, это направление сейчас бурно развивается, появляются очень интересные и перспективные методы. Но пока они уступают Hi-C: либо не позволяют получить полногеномную картину, либо слишком трудоемкие. Посмотрим, удастся ли им победить эти проблемы и вытеснить Hi-C по популярности».

Применение новых методов для изучения структуры хроматина открывает широчайшие возможности для исследования клеток разных типов и организмов, в том числе клеток сложнейшего органа — головного мозга. Например, Екатерина Храмеева использует метод Hi-C для изучения мозга на уровне отдельных нейронов. Следующая статья нашего спецпроекта расскажет о проектах по изучению системной нейробиологии, которые ведутся в рамках стипендии ФМИ на базе Сколтеха.

Источник