бластоциста на 5 день качество
Развитие эмбрионов
1 день. Оценка оплодотворения.
Спустя 16-18 часов после инсеминации (слияния полученных ооцитов и спермы) производится первая оценка оплодотворения. К этому времени эмбриолог видит сформировавшиеся пронуклеусы. На данном этапе происходит первая селекция – неоплодотворенные ооциты и аномальные зиготы изолируются от нормальных зигот.
Рис.1 Оплодотворенные яйцеклетки (пронуклеусы) – видны по два клеточных ядра.
2 день. Контроль развития эмбрионов.
Через 48 часов после получения ооцитов эмбриолог оценивает дробление эмбрионов, их морфологию (строение). Под морфологической оценкой понимают количество бластомеров (клеток) и аномалии цитоплазмы и ядра.
Идеальный эмбрион на 2 день должен иметь 4 равных по размеру одноядерных бластомеры без фрагментации.
Рис.2 Слева на картинке идеально сформированный эмбрион, состоящий из 4 бластомеров. Справа – строение нарушено, дальнейшее развитие прекратилось.
3 день. Контроль развития эмбрионов.
Через 72 часа после получения ооцитов производится оценка эмбрионов по следующим параметрам:
Количество бластомеров (клеток)- указывается цифра. В норме – 6-8 клеток.
На 3 день эмбриолог и лечащий врач могут принимать решение о сроке переноса эмбрионов. При переносе эмбрионов на 5 – день, на 3-й день все качественные эмбрионы переносятся в другую среду для культивирования до стадии бластоцисты.
Рис.3 Слева эмбрион отличного качества – оценка 8; Эмбрион по центру имеет небольшую фрагментацию – оценка 6 Sl Fr; Справа эмбрион сильно фрагментирован, подсчет бластомеров затруднен.
4 день. Дальнейшее культивирование эмбрионов.
К 4 дню процесс компактизации должен быть завершен, и эмбрион достигает стадии морулы.
Рис 4. Две отлично сформированные морулы.
5 день. Культивирование эмбрионов и перенос.
К этому времени эмбрион должен развиться до стадии бластоцисты. На основании морфологических признаков делается оценка возможности бластоцисты к дальнейшему развитию и принимается решение о ее пригодности к переносу в полость матки или витрификации (заморозке). Бластоцисты имеют цифровую и буквенную оценки.
Оценка степени развития бластоцисты и статуса хэтчинга (вылупления из оболочки):
1 – ранняя бластоциста: бластоцель меньше половины объема эмбриона (eBl);
2- бластоциста: бластоцель больше половины объема эмбриона (Bl 2);
3- полная бластоциста: бластоцель полностью заполняет эмбрион (Bl 3)$
4- экпандированная бластоциста: бластоцель полностью заполняет эмбрион, истончение зоны внешней оболочки (Bl 4 и Bl 5)
5- вылупляющаяся бластоциста: трофэктодерма начинает выступать их зоны вншней оболочки (Bl 5);
Оценка внутренне клеточной массы:
А – много плотно упакованных клеток;
B – несколько свободно сгруппированных клеток;
C – мало клеток, клетки плохо сгруппированы.
Оценка трофэктодермы:
А – много клеток, формирующих связанный эпителий;
В — несколько клеток, формирующих свободный эпителий;
C — несколько клеток серповидной формы.
Таким образом, эмбрион получает тройную оценку: BL 5АА
3-ех или 5-ти дневные эмбрионы. В чем разница?
Перенос эмбрионов (ПЭ) — последний этап ЭКО. Если цикл был успешным, пациент увидит положительный тест на беременность уже через две недели. Выбор дня для переноса зависит от индивидуальных особенностей каждого пациента и программы ЭКО. Учитывая эти моменты, лечащий врач подберет наилучший момент для ПЭ.
При выборе срока переноса, врач должен учитывать два важных фактора:
Юридических ограничений в отношении количества переносимых бластоцист нет, но эксперты согласны с тем, что перенос одного эмбриона предотвращает многоплодную беременность, которая влечет риски как для самих детей, так и для будущей матери.
Что касается второго момента, то трансфер можно выполнить на любой стадии развития, с 1 по 7 день. Но лучше всего делать это на 3 или 5 день, когда можно наиболее точно оценить качество эмбрионов. Определение дня для ПЭ долго было спорным вопросом. Научные исследования показали, что эффективность процедуры не зависит от выбранного дня. Поэтому врачи, выбирая момент для ПЭ, делают ставку на индивидуальные особенности пациента.
Подробнее о развитие эмбрионов по дням читайте в этом материале — примеч. altravita-ivf.ru.
Перенос эмбрионов на 3 день
В естественных условиях зачатие происходит в маточных трубах женщины. После оплодотворения зародыш мигрирует в полость матки, где происходит его имплантация. В случае ЭКО эмбрионы культивируются в лаборатории. Учитывая тот факт, что искусственная среда отличается от естественной, экспертам нужно сократить длительность культивации на питательной среде. Это объясняет необходимость выполнения переноса на 3 день.
Преимущества и недостатки переноса на 3 день
Главное преимущество ПЭ на 3 день — наличие большего количества эмбрионов, готовых к трансферу. Кроме того, у пары, планирующей несколько детей, будет больше зародышей для криоконсервации. Во время культивации некоторые эмбрионы могут погибнуть или оказаться нежизнеспособными. Именно поэтому врачи рекомендуют поместить их в полость матки на стадии 6-8 клеток.
Перенос эмбрионов на 5 день
На 5 день культивирования эмбрионы становятся бластоцистами. Это несколько осложняет ситуацию, поскольку врачу придется уделить особое внимание их метаболическим потребностям, которые изменяются, начиная с 3 дня. Как и в случае с трехдневными, ПЭ имеет преимущества и недостатки.
Преимущества и недостатки переноса эмбрионов на 5 день
Главный плюс переноса на 5 день — это тот факт, что бластоцисты с самым высоким потенциалом выбирается естественным путем. Большинство оплодотворенных яйцеклеток с хромосомными аномалиями не могут дожить до 5-6 дня. Кроме того, предимплантационная морфологическая оценка более точна, если она проводится на 5 день. Следовательно, и выбор бластоцистов с наилучшим потенциалом более точен.
Перенос в стадии бластоцисты можно синхронизировать с циклом эндометрия. Помимо этого, в естественных условиях оплодотворенная яйцеклетка не прикрепляется к слизистой оболочке матки раннее 5 дня развития, то есть перенос в стадии бластоцисты более приближен к естественным условиям. И, наконец, риск развития при ПЭ на 5 день сопровождается минимальным риском развития многоплодной беременности.
Главный недостаток переноса на 5 день заключается в том, что даже в современных условиях не все эмбрионы могут дожить до стадии бластоциты. Согласно исследованиям, частота отмены процедуры выше в группе 5 дня, особенно при небольшом количестве яйцеклеток.
Преимущества индивидуального подхода
Независимо от мнения ученых о лучшем моменте для проведения ПЭ, эмбриологи и репродуктологи предпочитают решать этот вопрос индивидуально. Действительно, сделать конкретное обобщение в этом случае очень сложно, поэтому нужно рассматривать каждый случай отдельно.
К основным аспектам, которые определяют день переноса, относятся:
Если требуется предимплантационная диагностика, биопсию выполняют на 3 день. Расширенное культивирование также применяется при ЭКО с донорскими яйцеклетками, так как при этом обычно доступно большое количество зародышей хорошего качества. И, наконец, когда требуется тест ERA, ПЭ будет запланирован в наиболее подходящий момент, в зависимости от результатов теста.
Как принять решение
Часто задаваемые вопросы
У вас есть вопросы? Проконсультируйтесь с нашими опытными врачами и эмбриологами.
Оценка качества ооцитов и эмбрионов
Все пациенты интересуются качеством полученных клеток, а в дальнейшем и качеством эмбрионов. Однако данный вопрос многофакторный и не имеет однозначного ответа. Начнем с начала. Первый вопрос, который задают пациенты, когда к ним в палату после процедуры забора ооцитов приходит эмбриолог, звучит всегда одинаково: «А клетки у меня хорошие?». Хочется сразу заметить, что на этот вопрос очень сложно ответить на данном этапе программы ВРТ. Первичная оценка ооцита основана на непосредственном визуальном анализе морфологии ооцит-кумулюсного комплекса. При получении ооцитов эмбриолог смотрит на клетки через бинокулярный микроском с незначительным уровнем увеличения. Выглядит это вот так:
В данной ситуации оценить детально качество ооцитов не представляется возможным. Эмбриолог может только делать предположения. Поэтому оценка ооцитов на этапе проведения трансвагинальной пункции яичников не проводится.
После забора ооцитов эмбриолог определяется с тем, каким методом проводить оплодотворение полученных клеток.
Метод оплодотворения выбирается на основании показателей мужского материала. Если показатели спермограммы снижены – выбирается метод ICSI. Суть его заключается в том, что эмбриолог очищает ооциты от клеток кумулюса и с помощью специальных инструментов, работая на специальном микроскопе, вводит морофологически хороший, активно-подвижный сперматозоид внутрь клетки. Перед тем как ввести сперматозоид в клетку, его обездвиживают. Данный метод оплодотворения предлагается также парам с бесплодием неясного генеза и пациентам, планирующим проведение преимлантационной генетической диагностики. Помимого этого, ИКСИ может быть проведено по желанию пациента.
При хороших показателях спермограммы проводится оплодотворение методом ЭКО. В чашке со специальной средой соединяют сперматозоиды и ооциты, а оплодотворение происходит естественным способом.
Итак, поговорим более подробно о зрелости и качестве ооцита.
Созревание ооцита до состояния, когда он способен к оплодотворению, происходит в процессе стимуляции суперовуляции, проводимой врачом гинекологом-репродуктологом. Не все ооциты в процессе стимуляции достигают зрелости.
Зрелый ооцит выглядит так
При оплодотворении методом ЭКО такую оценку не проводят. Возможность оценить клетки в данной ситуации возникает только утром следующего дня, а в это время не всегда возможно понять, какими клетки были в момент пункции, т.к. они имеют возможность пройти процесс дозревания в условиях инкубатора.
Что такое качество ооцита
Качество ооцита характеризует внешний вид цитоплазмы, вителлинового слоя, полярного тельца. Гомогенная цитоплазма с однородным цветом и отсутствием гранулярности характеризует хорошее качество ооцита. Вакуоли, темная окраска, всевозможные включения, деформация или гранулярность расцениваются при морфологической оценке качества ооцита как негативные признаки.
Ооцит плохого качества, с гранулированной цитоплазмой и вакуолью большого размера в центре.
Оценка оплодотворения в стадии бластоцисты
Оценка оплодотворения проводится утром следующего за пункцией дня. Этот день считается 1-м днем эмбрионального развития.
Возможность понять, произошло ли оплодотворение клетки, появляется через 18 часов после оплодотвоерния и характеризуется формированием пронуклеусов. Эмбрион первых суток развития называется зиготой.
На этот день эмбриолог оценивает «правильность» оплодотворения. Нормально оплодотворившийся ооцит содержит 2 пронуклеуса. Все остальные варианты считаются отклонением.
Триплоидный эмбрион (3pn)
Аномально оплодотворившиеся эмбрионы исключаются из культивирования.
Оценка качества эмбрионов 2-3 дня развития
Начиная со вторых суток эмбрионального развития начинается фаза дробления.
Эмбрион хорошего качества выглядит так.
4-е сутки эмбрионального развития
На 4-е сутки развития эмбрион человека состоит уже, как правило, из 16-18 клеток, межклеточные контакты постепенно уплотняются, и поверхность эмбриона сглаживается. Этот процесс называется компактизацией. Важно понимать, что до 3-х суток дробление эмбриона происходит механически, каждая клетка делится пополам, черпая энергию из запасов ооцита. Начиная с 4 суток эмбрионального развития начинается дифференциация клеток эмбриона, часть из них сформируют зародыш, остальные будут обеспечивать возможность имплантации и формирования плаценты.
На данном этапе эмбрионы наиболее чувствительны к отрицательным воздействиям.
Качество бластоцисты, которая сформируется из морулы, оценить практически невозможно.
Оценка качества морулы проводится по характеристикам компактизации:
Морулы отличного качества
Морула плохого качества
Далее внутри морулы начинает формироваться полость. Когда эта полость достигает достигает 20% от ее объема, эмбрион называется бластоцистой. В норме формирование бластоцисты допускается с конца 4-х по середину 6-х суток развития, но чаще это происходит на 5-е сутки. В редких случаях возможно формирование бластоцисты к 7-м суткам эмбрионального развития.
Бластоциста состоит из двух популяций клеток, таких как: трофэктодерма (однослойный эпителий, окружающий полость) и внутренняя клеточная масса (плотное образование из клеток внутри бластоцисты). Из трофэктодермы сформируется в дальнейшем плацента и все зародошевые оболочки. Из внутренней клеточной массы будут формироваться все ткани и органы будущего ребенка. На данном этапе развития эмбрион оценивают по 3 критериям:по размеру полости, качеству трофэктодермы и качеству внутриклеточной массы.
Размер полости оценивают цифрой от 1-ого до 4-х. Внутриклеточную массу и трофэктодерму оценивают буквами от А до С. Первая буква в оценке качества будет относится к внутриклеточной массе, вторая – к качеству трофэктодермы. Если бластоциста успела совершить «хетчинг» (разрыв оболочки, окружающий эмбрион), такой бастоцисте присваивается цифра 5. Если же бластоциста успела полностью выбраться из оболочки после хетчинга, такую бластоцисту обозначат цифрой 6. Размер полости имеет меньшее значение в определении качества эмбриона, чем буквенная классификация. Ввиду того, что эмбрионы имеют индивидуальные особенности, они могут развиваться неравномерно. Любой размер полости определяется как вариант нормы. Буквенные обозначения следует понимать так: наивысшее качество оценивается буквой А, наихудший вариант развития внутриклеточной массы и трофэктодермы обозначается буквой С.
Важно понимать, что критерии оценки эмбрионов носят субъективный характер. Даже эмбрионы, оцененные по классификации как эбмрионы среднего и ниже среднего качества, могут дать полноценную беременность.
Оценка качества эмбрионов
Центральным звеном клиники ЭКО является эмбриологическая лаборатория. Для каждой попытки ЭКО заводится «Эмбриологический протокол», в котором отражается судьба каждого эмбриона от момента получения ооцитов и до момента переноса или замораживания.
Сразу после получения ооцитов и сперматозоидов производится их морфологическая оценка. По результатам анализа эякулята (спермограмме) принимают решение о способе оплодотворения – ЭКО или ИКСИ.
Описание: День 0. Непосредственно после пункции оценивают зрелость полученных ооцит-кумулюсных комплексов (ОКК). ОКК с прозрачным кумулюсом как правило содержит зрелый ооцит и получает оценку «1-1».При пункции возможно получение зрелых, незрелых, а также дегенеративных и разрушенных яйцеклеток. Точная оценка состояния ооцита возможна только после его очистки перед проведением ИКСИ.
В зрелых, готовых к оплодотворению ооцитах определяется первое полярное тельце. В эмбриологическом протоколе зрелый ооцит обозначают MII.
Если процесс созревания ооцита в фолликуле нарушен или неправильно введен триггер (ХГ), то существует большая вероятность получения незрелых клеток, обозначаемых – MI и GV (Рис.1). Возможна и полная дегенерация ооцита (Deg).
Через 18-20 часов после добавления сперматозоидов или ИКСИ (1-е сутки) при нормальном оплодотворении образуются два пронуклеуса. Это предшественники ядер будущих клеток-бластомеров, на которые начинает делиться оплодотворенная яйцеклетка. При правильном оплодотворении оба пронуклеуса четко различимы. В этом случае им присваивают оценку 2pN. Если пронуклеусов не видно, что обычно связано с отсутствием оплодотворения, в протокол записывается 0pN. При неправильном оплодотворении возможно появление нескольких пронуклеусов, что отражается в записи, например 3pN, 6pN и т.д.(Рис2). «Неправильно» оплодотворенные ооциты не пригодны для дальнейшей работы и утилизируются.
Рис 2. Первый день развития in vitro – формирование зиготы и образование пронуклеусов. А – 2pN (нормальное оплодотворение) – два пронуклеуса Б – 3pN (аномальное оплодотворение) – больше, чем два пронуклеуса.
Дальнейшее развитие эмбриона, дробление, происходит в течение пяти-шести дней. Оценка качества эмбрионов проводится через 40-42 часа (2 сутки), 72-74 часа (3 сутки) и 120 часов (5 сутки) после оплодотворения. Дробление эмбриона должно быть симметричным (получаются бластомеры одинакового размера) и равномерным (все бластомеры претерпевают деление). Для наглядности эмбриологи используют численно – буквенную систему оценки качества, где цифра означает количество бластомеров, а буква их качество. Для обозначения эмбриона хорошего качества используется буквенный индекс «А», среднего «B», низкого «С». Возможны и промежуточные варианты, например АВ, ВА, ВС, СВ, когда сложно дать однозначную оценку (Рис3).
2-й день (4А) 3-й день (8А) 4-й день (comp)
Рис 3. Дробление эмбриона в течение первых трех суток in vitro и компактная морула на 4-й день развития. Представлены эмбрионы отличного (А) качества. B – бластомер ZP – блестящая оболочка.
Рис 4. Дробление эмбриона в течение первых трех суток in vitro. Представлены эмбрионы хорошего (ВА, В) и удовлетворительного (ВС) качества. Во втором ряду эмбрионы с неравномерным дроблением (3Bun и 4BAun).
К концу третьих и на четвертые сутки культивирования эмбрион начинает компактизацию (границы его клеток становятся неразличимы) и готовится к образованию бластоцисты. Его клетки могут быть частично (p.comp) или полностью компактизованы (comp) (Рис.5). Обычно оценка эмбрионов на четвертые сутки не проводится ввиду малой информативности данной стадии развития. Однако наличие компактизации на вторые сутки может свидетельствовать об аномальном развитии и обязательно должна отражаться в эмбриологическом протоколе.
На пятые сутки, примерно через 120 часов после оплодотворения эмбрион образует бластоцисту (Bl) (Рис.6). Оценка качества бластоцист подразумевает ее размер, который отражается цифрами от 1 до 5; состояние внутренней клеточной массы (ВКМ) (от «A» до «С») и окружающих ее клеток – трофобласта (от «а» до «с»). Лучшими для переноса будут бластоцисты размера от 3 до 5, имеющие многоклеточную ВКМ и трофобласт – Bl4Aa, Bl4Ab. Бластоцисты среднего качества обозначаются как – Bl2Bb, Bl3Bb, а плохого – BlCc.
Рис 6. Бластоцисты на пятый день развития in vitro. e.bl – ранняя бластоциста, Bl3Ab – экспандированная бластоциста, Bl5Ab – бластоциста перед хетчингом, ВКМ – внутренняя клеточная масса.
Дальнейшее развитие эмбриона происходит уже в матке после имплантации. Для успешной имплантации бластоцисте необходимо выйти из окружающей ее блестящей оболочки. Данный процесс называется вылупление, или хетчинг. В случае, когда эмбриолог отмечает изменения блестящей оболочки и после криоконсервации эмбрионов процесс самостоятельного вылупления бластоцисты может быть затруднен и его возможно облегчить применяя вспомогательный хетчинг. В нашем центре мы используем наиболее эффективный лазерный вспомогательный хетчинг.
Самая высокая частота оплодотворения получена при переносе эмбрионов на стадии бластоцисты. Так, в нашем центре она составляет 53%. В то время, как при переносе на стадии 6-8 бластомеров – 47%.
Замораживание и ПГД также лучше всего выполнять на стадии бластоцисты. Однако, не все эмбрионы доходят до бластоцисты. Поэтому общепринятым считается следующий подход: если на 5 день культивирования имеется меньше 5 эмбрионов, как минимум один переносят, остальные оставляют до 5 дня. Из достигших бластоцисты еще один может быть перенесен (двойной перенос), остальные замораживают. Если на 3 день эмбрионов 5 и больше, их не переносят и оставляют культивировать до 5 дня. На 5 день одну, реже две бластоцисты переносят, остальные замораживают.
В заключение следует отметить, что описываемые морфологические критерии оценки качества эмбрионов являются основными, необходимыми, но не всегда достаточными для выбора эмбриона для переноса. Так, нередко после переноса эмбрионов высшего качества имплантация не наступает и, наоборот, бывают случаи наступления и успешного развития беременности при переносе эмбрионов плохого качества. Поэтому существуют дополнительные способы прогноза имплантации эмбриона (time-laps, ПГС, анализ метаболитов и др.), которые дополняют морфологические критерии и обеспечивают в совокупности выбор лучшего эмбриона.
Бластоциста в процессе хетчинга (выхода из блестящей оболочки для имплантации)
Скидка 50% на первичный прием репродуктолога
Заполнив анкету для будущих родителей, вы сэкономите время врача на первичном приеме, поэтому он будет для вас стоить 50% от обычной цены.
О классификации эмбрионов. Буквы и цифры в обозначении.
Основная задача эмбриолога – выбрать наиболее перспективный по качеству эмбрион! А как оценивают то самое качество?
⠀
В большинстве программ (кроме программ эко с генетическим исследованием эмбрионов) основная оценка происходит по морфологическим признакам эмбриона – внешнему строению. Морфологических признаков много, в основном, ориентируются на количество клеток (должно соответствовать дню развития), степень фрагментации, равномерность дробления.
⠀
День пункции – 0 день! На следующий день эмбриолог смотрит, как прошло оплодотворение – это 1 сутки развития! Об этом будет отдельный пост! ⠀
Далее в норме можно наблюдать такую картину:
Именно цифрой обозначается количество клеток (бластомеров) у эмбриона.Далее после цифры идёт буква – обозначает наличие (степень фрагментацию) или ее полное отсутствие.
Эмбрионы с фрагментацией D не переносят и не замораживают. Буквенно-цифровое обозначение выглядит как 8А, 6В и так далее, А считается лучшим показателем.
⠀
Если говорить о бластоцистах – эмбрионах 5 суток, то их качество оценивается 👉🏻по размеру, качеству внутриклеточной массы (сам эмбрион) и качеству трофэктодермы (клеток, дающим начало хориону, плаценте).
⠀
Здесь цифрами обозначается размер бластоцисты:
Первая буква в аббревиатуре – качество внутриклеточной массы:
Вторая буква в аббревиатуре – качество трофобласта, который даёт начало внезародышевым оболочкам эмбриона:
Соответственно, буквы АА означают лучшее качество.
Морфологическая оценка – это лишь то, что эмбриолог видит глазом! Успех программы зависит от генетического статуса эмбриона, о котором мы можем узнать только по результатам генетического скрининга. Так бывает, что отличный морфологически эмбрион несёт в себе генетические патологии. А иногда эмбрион среднего качества по анализу приходит абсолютно здоровым, который при переносе даёт нормальную беременность!
Автор публикации: наш замечательный эмбриолог – Гридина Анастасия Владимировна!
Эмбрион среднего качества. Однако, шансы на успех все же есть, если этот эмбрион генетически здоров.
Риск хромосомных аномалий зависит в большей степени от возраста, однако среди эмбрионов категории С доля аномальных – выше.
Морфологически – это эмбрион среднего качества. Учитывая ваш возраст, конечно, большее значение имеет генетический статус.
Стадия компактизации – это стадия, предшествующая моруле. Если качество соответствует суткам развития, то шансы конечно есть.
Это хорошее качество.
Качество ниже среднего, риск, что есть хромосомные аномалии – выше, особенно учитывая, что это эмбрионы 7 суток