Химико токсикологическое исследование что это такое

Что такое анализ ХТИ?

Каждому современному человеку необходимо знать, что такое ХТИ, поскольку столкнуться с необходимостью проведения этого анализа сегодня можно в различных жизненных сферах и ситуациях. Причем от точности его результата иногда зависит сохранение места работы, репутации или даже личной свободы граждан.

Указанная аббревиатура расшифровывается как химико-токсикологическое исследование, целью которого является обнаружение инородных веществ в человеческом организме. Оно способно выявить качественный и количественный состав не только токсинов, но и других соединений.

Биоматериалом для проведения анализа является моча. Чтобы результат был показательным, важно соблюсти определенные условия:

Также важно учитывать, что исследование должно выполняться в лаборатории, имеющей лицензию на подобный вид медицинской деятельности. Бланк с результатом оформляется в соответствии с формой, утвержденной приказом Минздравсоцразвития РФ, заверяется подписью врача и печатью учреждения. Также должен прилагаться акт врачебного осмотра.

При несоблюдении этих условий документ может быть признан недействительным!

Что помогает выявить ХТИ

При сильной интоксикации организма ядами проверка мочи поможет распознать отравляющие факторы.

При этом важно учитывать, что достаточное для определения при помощи анализа содержание большинства психотропных веществ в моче сохраняется не больше 3-6 суток с момента приема. Исключением являются каннабиноиды – они не покидают организм до 3-х недель.

Преимущества химико-токсикологического исследования

Как проводится анализ ХТИ

Определение содержания в моче инородных веществ сегодня проводится с использованием двух основных методик:

1. Иммунохроматографический способ.

При этом подходе используются специальные тест-полоски, которые погружаются в исследуемый биоматериал. Их внутренние фильтры абсорбируют жидкость, обнаруживая антигены определенных веществ.

Если они имеются в составе, то на поверхности полоски появляется одна красная линия. Чем выше концентрация вещества, тем интенсивнее будет окрашивание. Если же инородные составляющие отсутствуют, проявляется две полоски.

2. Химико-токсический метод.

Считается расширенным вариантом исследования, поскольку помогает обнаружить все распространенные психотропные вещества. Однако на это уходит больше времени – до 4-х суток. Поэтому проведение химико-токсической проверки обычно назначается при обнаружении посторонних компонентов в биоматериале в ходе экспресс-теста.

Этот метод химико-токсикологического исследования мочи включает в себя проведение:

Для каждого направления предусмотрена выдача справок о проведении анализа.

Кому может потребоваться проведение ХТИ

Профессиональное проведение анализа ХТИ в «Поликлиника «ПрофиМед»

Порядок проведения проверки определенного лица на алкогольное или наркотическое опьянение определен Минздравом РФ. Только медицинские организации, четко придерживающиеся существующих требований и имеющие разрешение на такую деятельность, способны дать достоверное заключение о состоянии пациента.

Если тест не выявляет наличие искомых инородных веществ, в день обращения выдается итоговое заключение.

Если же содержание алкоголя и психотропных веществ было выявлено, то биоматериал перенаправляется для расширенного исследования. В такой ситуации ожидание итогового заключения может занять до 10 рабочих дней.

Заключение об отсутствии психотропов и алкоголя в моче выносит врач-нарколог, а справку об их содержании предоставляют сотрудники химико-токсикологической лаборатории.

«Поликлиника «ПрофиМед» имеет необходимый опыт, оборудование и разрешительные документы для проведения ХТИ. Мы обеспечиваем своим пациентам привлекательные расценки на услуги и обслуживание без очередей!

Узнать больше об исследовании можно по телефонам: +7 (495) 642-84-03, +7 (495) 780-47-39.

Источник

ХТИ анализ

ХТИ анализ мочи, что покажет химико-токсикологическое исследование

ХТИ анализ мочи – химико-токсикологическое лабораторное исследование, главная цель которого – обнаружить различные вещества в человеческом организме, а точнее их метаболиты (продукты трансформации). Анализ покажет качественный и количественный состав не только токсинов, но и других вредных соединений. Для проведения исследования используется моча, которую важно собрать, соблюдая определенные установленные правила для исключения «фальсификации результатов». ХТИ анализ проводится в специальной лаборатории, имеющей разрешение на подобный вид медицинской деятельности.

Наши специалисты

Готлиб Вероника Яковлевна

Врач психиатр-нарколог
высшей категории

Чудаева Александра Айваровна

Врач — психотерапевт, стаж работы 7 лет

Данилова Людмила Юрьевна

КМН, Доцент, врач-психиатр, стаж более 30 лет

Коваленко Лилия Анатольевна

Суть исследования

Химико-токсикологическое исследование – это анализ, который
проводится с применением специального лабораторно-диагностического
оборудования, позволяющего получить точные результаты. Главная задача процедуры
– определить наличие наркотических, психотропных и других токсических веществ в
человеческом организме.

В зависимости от цели проведения анализа, с помощью исследования можно выявить:

Иногда такой вид обследования назначают пациенту с подозрением на отравление. Анализ поможет идентифицировать токсин и назначить эффективную терапию.

В современных лабораториях определение содержания в моче
посторонних веществ проводится с применением двух основных способов:

Проводится преимущественно после обнаружения посторонних веществ в моче в ходе экспресс-тестирования методом ИХА.

Для исследования применяется специальное лабораторное оборудование. Готовые результаты можно получить на 5 – 7 сутки.

Когда нужно сдавать мочу на ХТИ

Токсикологическое исследование рекомендуется пациентам при
наличии характерных признаков интоксикации. Отдельно или в совокупности они
помогут заподозрить патологические изменения, связанные с присутствием в
организме веществ, влияющих не только на физическое, но и на психологическое
состояние. При тяжелом отравлении у человека может наблюдается патологическая
симптоматика, являющаяся поводом пройти ХТИ:

Сдавать мочу на химико-токсикологический анализ могут не
только люди, которых подозревают в употреблении запрещенных веществ. Проведение
ХТИ может потребоваться лицам, которые:

Какие вещества определяет ХТИ

Если результаты ХТИ положительные, в справке указывается подробная расшифровка и количество веществ, выявленных в биологическом образце. Список запрещенных веществ, которые поможет обнаружить в моче химико-токсикологическое исследование, предложен в таблице:

А также фенициклидин (РСР), синтетические каннабиноиды, синтетические катиноны.

Иногда химико-токсикологическое исследование показывает
ложноположительный результат. В этих случаях необходимо исключить употребление
определенных групп медикаментозных средств:

Особенности проведения ХТИ анализа

Процедура проводится в несколько этапов:

Алгоритм проведения анализа

Накануне проведения ХТИ анализа нельзя употреблять пищу с
маком, принимать снотворные и седативные препараты. Если сдача анализа
плановая, для получения достоверных результатов требуется подготовка:

Чтобы результаты исследования были максимально точными, забор мочи должен производиться в условиях, которые полностью исключают возможность замены или фальсификации биологического материала. В идеале моча должна быть собрана непосредственно в лаборатории и сразу передана в руки медицинскому персоналу.

В течение первых пяти минут проводится первичное
исследование образца, которое включает определение таких показателей:

Если во время предварительного исследования обнаружено несоответствие этих показателей нормам, проводится повторный забор мочи. Образец исследуется для получения доказательных результатов и идентификации наркотических средств.

Правила сбора и хранения образцов

Для точного анализа потребуется средняя порция жидкости. Именно в ней содержится точная концентрация алкоголя и наркотических веществ. Если по каким-либо причинам не получается сразу доставить образец в лабораторию, его следует накрыть плотной крышкой и поставить в холодильник максимум на 36 часов.

Если возникла необходимость в длительной сохранности, биоматериал помещается в морозилку, где он может храниться около 70 дней. В образце сохранятся остатки токсических веществ, которые удастся легко обнаружить после размораживания.

Сколько времени наркотики сохраняются в моче?

Чем меньше времени уйдет после приема наркотических веществ,
тем более точными будут результаты ХТИ. На скорость выведения токсических
веществ также влияют такие факторы, как:

Время выведения из организма разных видов наркотических
веществ наведено в таблице:

Ложное срабатывание ИХА-тестов на лекарственные препараты.

Положительные результаты ИХА-тестов, в результате употребления разовых дозировок лекарственных препаратов общего назначения, продуктов питания.

Цена на анализ ХТИ в Москве составляет в среднем 3000-7500 рублей. Это зависит от объема исследований. Чтобы уточнить стоимость процедуры и записаться на прием к специалисту, позвоните по номеру +7 495 105-57-25 или закажите обратный звонок, заполнив онлайн-форму, предложенную на сайте клиники. Как только наши администраторы увидят ваш запрос, то сразу перезвонят, чтобы уточнить детали и ответить на все интересующие вопросы.

Обращайтесь к квалифицированным специалистам, работающим именно с этой возрастной группой, так Вы повысите шанс получить качественную и точную информацию о состоянии Вашего ребенка. А по необходимости и всю необходимую медико-психологическую помощь в реабилитации.

Автор материала:
Готлиб Вероника Яковлевна

Врач — психиатр-нарколог высшей категории

Записаться на консультацию к врачу

Преимущества

Ориентированы на работу с пациентами детско-юношеского возраста, опираясь на опыт и знания в этой области.

Проводим работу со всей семьей в разных плоскостях и направлениях обеспечивая высокий уровень комплексной медицинской и психологической помощи

Формируем программу исходя из запроса и потребностей конкретной семьи с учетом возрастных и психологических особенностей пациента.

Апробированная уникальная программа, составленная с учетом психофизиологических особенностей подростков.

Анонимность и конфиденциальность — необходимое условие для создание безопасности наших пациентов.

Отзывы

Вероника Яковлевна Готлиб- уникальный в стране специалист, и собрала команду профи. Это место, где на первом месте стоит не интерес к вашему кошельку, а желание помочь. Я благодарю сотрудников центра за уважение, принятие и сочувствие, за поддержку каждый раз, когда это было необходимо. Александра Айваровна Чудаева, Алексей Александрович Казаков, Сергей Александрович Галкин- низкий поклон за ваш труд! Вероника Яковлевна, Вы дарите семьям надежду, спасибо Вам огромное!

Елена и Ева 14 лет

Вероника Яковлевна Готлиб здорово помогла нам с дочкой. Переходный возраст, взаимное недопонимание, диагноз депрессия. Вероника Яковлевна умеет задавать правильные вопросы подростку и родителю, всегда с юмором, честно, с большим вниманием и искреннем желанием помочь. Я очень рада, что каким-то чудом, мне дали контакты Вероники Яковлевны.

Всем добрый день. Сегодня я хочу передать слова благодарности руководителю РЦ, Веронике Яковливне и её команде. Когда в моей семье случилось несчастье и я узнала, что мой сын наркоман и алкоголик, я обратилась за помощью. Профессиональные и отзывчивые работники РЦ Вероники Яковлевны вернули мне моё здравомыслие и душевный покой. И мой сын узнал, что можно жить счастливо в трезвости и получил знания и инструменты, для того, чтобы вести здоровый образ жизни. Дай Бог побольше таких людей, как в этом реабилитационном центре.

Выражаю огромную благодарность всему коллективу наркологического центра под руководством Готлиб Вероники Яковлевны! Спасибо вам за помощь, за ваше отношение, за вашу отзывчивость, отклики и поддержку! Вы делаете очень благородное дело! Желаем вам ещё большего успеха в вашем нелегком деле!

Искреннюю благодарность выражаем Веронике Яковлевне Готлиб за своевременную помощь и дальнейшую поддержку в лечении нашего сына от наркомании. Веронике Яковлевне удалось собрать под одной крышей самый квалифицированный персонал, самых лучших психологов, консультантов, врачей. Пока сын проходил лечение, мы выздоравливали в группе родителей. Благодаря высококвалифицированным специалистам, под руководством Готлиб В. Я., наш сын прошёл лечение, снялся с учёта, отслужил в армии, сейчас работает. Спасибо Вам за нелёгкий труд, за отзывчивость и понимание!

Огромная благодарность детскому наркологическому центру. Особая благодарность заведующей Веронике Яковлевне Готлиб и всему работающему персоналу. За помощь, отзывчивость, за все то, что они делают, спасая наших детей. За психологическую помощь, не только детям, но и взрослым (нам родителям). Очень надеемся, что этот детский центр во главе с Вероникой Яковлевной Готлиб спасет еще немало детских жизней.

Хочу выразить огромную благодарность всем сотрудникам Детского наркологического центра, а также лично его Заведующей Веронике Яковлевне Готлиб, за профессионализм, чуткость, внимание и любовь к таким непростым пациентам, как подростки-наркоманы. Это семейная болезнь очень тяжелая, коварная и неизлечимая. Но и дети и их созависимые родители могут выздоравливать и жить нормальной жизнью, и весь коллектив и Вероника Яковлевна лично делают все возможное, чтоб выздоравливало, как можно больше пациентов. Хочу выразить всем огромную благодарность за Вашу непростую работу и за все то, что Вы делаете для нас!

Источник

Химико токсикологическое исследование что это такое

Бюро судебно-медицинской экспертизы Ленинградской области

Санкт-Петербургское бюро судебно-медицинской экспертизы, Санкт-Петербург, Россия, 195067

Санкт-Петербургское ГБУЗ «Бюро судебно-медицинской экспертизы», Санкт-Петербург, Россия, 195067

Химико-токсикологическое исследование ГОМК в биообъектах и интерпретация результатов анализа

Журнал: Судебно-медицинская экспертиза. 2018;61(5): 25-30

Лобан И. Е., Горбачева Т. В., Бычков В. А. Химико-токсикологическое исследование ГОМК в биообъектах и интерпретация результатов анализа. Судебно-медицинская экспертиза. 2018;61(5):25-30.
Loban I E, Gorbacheva T V, Bychkov V A. The chemical toxicological investigation of gamma-hydroxybutyric acid in biological objects and the interpretation of the results of the analysis. Sudebno-Meditsinskaya Ekspertisa. 2018;61(5):25-30.
https://doi.org/10.17116/sudmed20186105125

Бюро судебно-медицинской экспертизы Ленинградской области

Предложена методика количественного определения γ-оксимасляной кислоты (ГОМК) в крови, моче и биотканях методом газовой хроматографии с масс-селективным детектором. Пробоподготовка проводилась методом жидкость-жидкостной экстракции бутилацетатом с последующей дериватизацией проб BSTFA + 1% TMCS. Градуировочные графики линейные в диапазоне концентраций 26,4—1321,6 мг/л. Коэффициент корреляции графиков более 0,999. Предел обнаружения ГОМК в крови, моче и внутренних органах — 10 мг/л. Предел количественного определения — 26 мг/л.

Бюро судебно-медицинской экспертизы Ленинградской области

Санкт-Петербургское бюро судебно-медицинской экспертизы, Санкт-Петербург, Россия, 195067

Санкт-Петербургское ГБУЗ «Бюро судебно-медицинской экспертизы», Санкт-Петербург, Россия, 195067

Натрия оксибутират (натриевая соль γ-оксимасляной кислоты, натриевая соль 4-оксибутановой кислоты, натрия оксибутират, натрия оксибат) — одно из самых интересных и сложных веществ при интерпретации результатов его определения в биологическом материале.

Впервые γ-оксимасляная кислота (ГОМК, 4-оксибутановая кислота) синтезирована в 1874 г. русским химиком-органиком А. Зайцевым [1]. Методика синтеза была опубликована в 1929 г. Это вещество не вызывало у исследователей особого интереса, пока французский фармаколог А. Лабори не занялся изучением его биологической роли. Результатом его исследований стало внедрение натрия оксибутирата в клиническую, а с 1960 г. — в анестезиологическую практику. ГОМК не может проникать через гематоэнцефалический барьер; эту способность ей придает форма натриевой соли [2].

Натрия оксибутират применяется в клинической практике более 50 лет, но представления о точном механизме его действия противоречивы. Предполагают, что основной механизм выключения сознания состоит в блокировании передачи на постсинаптическом уровне в ядрах ретикулярной формации и прямом торможении активности коры головного мозга. Натрия оксибутират оказывает транквилизирующее и снотворное действие. Анальгетические свойства слабые. Засыпание происходит плавно, без стадии возбуждения. Вещество в целом оказывает противосудорожное действие. Натрия оксибутират обладает выраженными системными антигипоксическими, радиопротекторными свойствами, повышает устойчивость к ацидозу и гипотермии. Он стимулирует выделение соматотропного гормона роста, являясь одним из мощнейших на сегодняшний день стимуляторов гипофиза [3]. До начала 90-х годов XX века ГОМК продавалась (в частности, в США) как биологическая добавка для формирования мышечной массы [4].

В Государственный реестр лекарственных средств РФ в настоящее время включена одна лекарственная форма натрия оксибутирата — раствор для внутривенного или внутримышечного введения в концентрации 200 мг/мл. В России натрия оксибутират разрешен для применения в анестезиологии как неингаляционный гипнотик, особенно у пациентов с выраженной эндогенной интоксикацией, гипоксией любой этиологии, и в акушерской практике. Возможно также сочетание с любыми ингаляционными и внутривенными анестетиками. Натрия оксибутират применяется в наркологической практике для лечения алкоголизма, купирования абстинентного синдрома и похмелья. В данном качестве он используется в Италии и Австрии [5, 6].

В Российской Федерации оксибутират (4-гидроксибутират натрия) и другие соли γ-оксимасляной кислоты включены в список психотропных веществ, оборот которых ограничен (Список III Постановления Правительства Р.Ф. № 681 от 30.06.98). Включение натрия оксибутирата в список контролируемых веществ объясняется его немедицинским употреблением наркозависимыми лицами, прежде всего молодежью. На уличном сленге оксибутират натрия известен как «Буратино», «Бутират», «Гомк», «Бутик» и т. д. Действие препарата сравнимо с действием наркотических средств амфетаминового ряда. При употреблении малых доз достигается эффект, подобный слабому алкогольному опьянению. Средние дозы способствуют усилению релаксации, отмечается повышенная чувствительность к музыке, желание танцевать. Высокие дозы препарата вызывают сон [7].

Натрия оксибутират употребляют перорально (пьют) или вводят внутривенно медленно 1—2 мл/мин [7].

Для достижения наркотического эффекта возможно употребление экзогенных прекурсоров ГОМК: γ-бутиролактона (ГБЛ) и 1,4-бутандиола, представляющих собой органические растворители, используемые в различных областях промышленности. Они конвертируются в организме в ГОМК в течение примерно 1 мин [10]. Их фармакологические и поведенческие эффекты на организм определяются ГОМК, которая является целевым аналитом при проведении химико-токсикологических (судебно-химических) исследований.

Токсикокинетика. Натрия оксибутират быстро всасывается после перорального приема, максимум концентрации в крови достигается через 20—40 мин. Связывание с белками плазмы составляет менее 1%. При терапевтических концентрациях период полувыведения 30—50 мин. ГОМК метаболизируется ферментами печени с образованием конечных продуктов диоксида углерода и воды; активных метаболитов ГОМК не образует.

ГОМК является эндогенным продуктом метаболизма, и его следовые количества присутствуют в тканях и жидкостях здоровых людей, не употреблявших ГОМК. По представленным в литературе результатам исследований, эндогенная ГОМК в моче живых лиц составляет 0,5—2 мг/л и в редких случаях больше, но не превышает 5 мг/л; в крови живых лиц от 0,17 до 1,51 мг/л [11, 12]. Наличие эндогенной ГОМК в биологических объектах требует обязательного установления уровня концентрации (cut-off), ниже которой результат определения ГОМК должен считаться эндогенным и не расцениваться как факт приема оксибутирата. В биообъектах от живых лиц количество эндогенной ГОМК в моче выше, чем в крови. Для посмертных объектов наблюдается обратная закономерность — содержание эндогенной ГОМК в крови выше, чем в моче. Следовательно, для анализа прижизненных и посмертных биообъектов должны использоваться разные значения cut-off для ГОМК. Для биообъектов от живых лиц предлагают следующие значения cut-off: для крови — 5 мг/л и для мочи — 10 мг/л [13—15]. На данный уровень cut-off не влияют рН мочи, индекс массы тела, раса [16], пол, курение, прием алкоголя [17], сахарный диабет, беременность [18]. Во всех случаях эндогенная концентрация ГОМК ниже предложенных пороговых значений.

Количество эндогенной ГОМК в посмертных объектах выше, чем в прижизненных. Исследователи из Японии предположили механизм новообразования ГОМК в посмертных объектах из тетраметилдиамина — продукта посмертного распада белка. Молекула амина конвертируется в 4-амино-бутилальдегид с последующим окислением в ГОМК [19]. Для посмертных объектов в литературе предлагаются следующие значения cut-off: для мочи 20 мг/л и для крови 30—50 мг/л [20, 21] (30 мг/л для периферической крови и 50 мг/л для крови из полости сердца) [22]. По данным литературы [23], содержание ГОМК в посмертных объектах увеличивается при хранении объектов в условиях холодильника в течение 4 мес, но все равно не превышает пороговых концентраций 20 мг/л для мочи и 30 мг/л для крови.

R. Baselt [24] приводит следующие данные по дозам оксибутирата натрия: 10 мг/кг вызывает амнезию, 20—30 мг/кг — сон, 50 мг/кг и более — наркоз. При пероральном приеме 25 мг/кг натрия оксибутирата наблюдали содержание ГОМК в крови 80 мг/л через 0,5 ч и 75—90 мг/л через 2 ч. В случае внутривенного введения 50 мг/кг натрия оксибутирата количество ГОМК в крови составляет 170 мг/л через 15 мин. Содержание в крови 360 мг/л ГОМК соответствуют глубокому сну, 156—260 мг/л — управляемому сну, 56—156 мг/л — легкому сну и менее 52 мг/л — пробуждению от сна.

Данные о концентрации ГОМК в крови лиц, употреблявших натрия оксибутират с немедицинской целью, в доступной литературе многочисленны и разнообразны. Это объясняется быстрым выведением ГОМК из крови, различными временны́ми периодами при отборе проб в каждом конкретном случае и дозой принятого натрия оксибутирата. A. Jones и соавт. [25] приводят данные по определению концентрации ГОМК в крови 584 водителей: диапазон концентраций ГОМК составил 8—340 мг/л. По данным другого исследования [26], диапазон концентраций ГОМК составил 80—190 мг/л.

Количество ГОМК в посмертных биологических объектах может достигать очень высоких значений. По данным D. Zvosec и соавт. [27], при анализе 60 смертельных отравлений натрия оксибутиратом концентрация ГОМК составила в среднем 561 мг/л (диапазон от 66 до 4400 мг/л).

D. Lenz и соавт. [28] приводят данные о содержании ГОМК и γ-бутиролактона (ГБЛ) в биообъектах мужчины 38 лет, погибшего от передозировки ГБЛ. Содержание ГОМК составило: 1052 мг/л (сердечная кровь), 932 мг/л (венозная кровь), 711 мг/кг (головной мозг), 1245 мг/кг (легкие), 1080 мг/кг (печень), 1668 мг/кг (почки), 954 мг/л (моча), 2942 мг/кг (желудок), а ГБЛ: 31 и 21 мг/л; 95, 61, 112, 458 мг/кг, 54 мг/л и 9528 мг/кг соответственно.

Наиболее полный обзор аналитических методов определения ГОМК в биологических объектах представлен в работе A. Ingels и соавт. [29]. В зарубежных источниках [30, 31] приводятся данные об успешном использовании энзимных методов обнаружения ГОМК в крови и моче, что значительно облегчает задачи скрининговых анализов биопроб на присутствие ГОМК. Стандартными методами определения ГОМК в биологических объектах остаются методы газовой хроматографии с плазменно-ионизационным и масс-селективными детекторами [32]. Применение газожидкостной и жидкостной хроматографии с тандемной масс-спектрометрией оправдано при анализе так называемых альтернативных объектов: волосы, пятна крови и т. д., в которых содержание ГОМК заведомо низкое. Для скрининговых судебно-химических исследований посмертных биологических жидкостей и биотканей метод газовой хроматографии с одноквадрупольным масс-селективным детектором (ГХ-МС) является адекватным выбором.

Цель исследования — разработка и внедрение в практику работы судебно-химического отделения СПб ГБУЗ БСМЭ методики судебно-химического анализа посмертных биообъектов для определения ГОМК в биологических объектах.

Материал и методы

В экспериментах использовали газовый хроматограф с масс-селективным детектором МАЭСТРО 7820А-5975, оснащенный капиллярной кварцевой колонкой НР-5МS длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм и толщиной пленки 0,25 мкм.

Условия детектирования: энергия электронов ионизации 70 эВ; регистрация масс-спектров в режиме полного сканирования в интервале масс 40—500 а.е.м.

Управление прибором и сбор данных осуществляли с помощью программного обеспечения MSD ChemStation, обработку результатов и анализ данных — в DataAnalysis и АМDIS.

Режим хроматографирования: скорость газа-носителя 0,8 мл/мин; задержка включения детектора 9 мин после ввода пробы; температура инжектора 280 °C, интерфейса 280 °C, температура колонки программируемая — начальная 60 °C (1 мин), затем нагревание колонки со скоростью 5 °С/мин до 100 °C с выдержкой при конечной температуре 15 мин.

Кроме того, использовали центрифугу Liston C 2201, вибрационный встряхиватель IKA VXR basicVibrax, Вортекс Elmi V-3, бутилацетат марки «Ч», натрия оксибутират раствор для внутривенного и внутримышечного введения 200 мг/мл (ФГУП «Московский эндокринный завод»), тимол марки «для аналитики», BSTFA + TMCS 99:1 (фирмы SUPELCO).

Для разработки методики использовали донорскую кровь и образцы свиной печени.

При пробоподготовке биологических объектов для определения токсикантов учитывали их физико-химические свойства и особенности биологической матрицы.

Результаты и обсуждение

Натрия оксибутират — белый или белый со слабым желтоватым оттенком кристаллический порошок со слабым специфическим запахом, легко растворим в воде, растворим в этаноле. ГОМК — кристаллический порошок, легко растворим в воде. Водные растворы имеют слабощелочную реакцию среды.

По данным литературы [33—36], изолирование ГОМК из биообъектов можно проводить методами жидкость-жидкостной экстракции — ЖЖЭ (экстрагенты — этилацетат, ацетон, ацетонитрил) и твердофазной экстракции — ТФЭ. ЖЖЭ — самый распространенный метод экстракции токсикантов из биообъектов при проведении судебно-химических исследований, так как позволяет экстрагировать широкий спектр токсикантов и имеет значительно более низкую стоимость по сравнению с методами ТФЭ. Особенностью ГОМК и натрия оксибутирата является их высокая растворимость в воде и органических растворителях. При проведении пробоподготовки биообъектов для определения ГОМК необходимо учитывать, что при рН 3 ), чем ацетонитрил (10 мг/м 3 ), хлороформ (5 мг/м 3 ), и, следовательно, более низкую токсичность, что важно для обеспечения наиболее безопасных условий труда в лаборатории при производстве большого объема скрининговых исследований.

Анализ биологических объектов имеет смысл только при определении количественного содержания ГОМК. В связи с этим в пробу в процессе пробоподготовки сразу добавляют внутренний стандарт (тимол). В данном качестве (для количественного определения ГОМК) он отвечает всем основным требованиям, предъявляемым к внутреннему стандарту:

1) не является эндогенным веществом и не содержится в биологических пробах (случаи определения тимола в биопробах исключительные);

2) имеет близкие физико-химические свойства к целевому аналиту (изолируется из биоматериала по той же методике, что и аналит);

3) подвергается дериватизации (определение ГОМК методом хромато-масс-спектрометрии возможно только в виде дериватов из-за высокой полярности соединения);

4) имеет близкие хроматографические свойства (относительно близкое время удерживания на хроматографических колонках);

5) устойчив в виде растворов.

Пробоподготовка крови и мочи: флакон с кровью (мочой) встряхивали на Вортексе до достижения гомогенности (данная стадия пробоподготовки обязательная, так как концентрация ГОМК в сыворотке крови выше, чем в цельной крови). Это объясняется хорошей растворимостью ГОМК в крови и, следовательно, более высокой концентрацией ГОМК в биообъектах с большим содержанием воды. Соотношение концентраций ГОМК сыворотка/кровь 1,23:1 [37].

Механическим дозатором отбирали 1 мл крови (мочи) и помещали в центрифужную стеклянную пробирку. К пробам крови добавляли 300 мкл воды и встряхивали на Вортексе в течение 3 с, посмертная кровь может содержать меньшее количество воды; добавление воды в пробу позволяет получить более жидкую пробу, что повышает эффективность экстракции ГОМК. Затем добавляли 50 мкл раствора тимола в бутилацетате в концентрации 41,6 нг/мкл. Встряхивали на Вортексе в течение 3 с. Экстрагировали 250 мкл бутилацетата с использованием встряхивателя VXRbasicVibrax в течение 10 мин при 1000 об/мин. Центрифугировали при 3500 об/мин в течение 10 мин. Верхний слой органического растворителя в количестве 100 мкл отбирали дозатором и переносили в виалу для автосамплера. Добавляли 100 мкл BSTFA + 1% TMCS. Виалу закрывали, термостатирвали 30 мин при температуре 80 °C. После охлаждения пробу анализировали методом хромато-масс-спектрометрии.

Пробоподготовка биотканей: 3 г биоткани мелко измельчали, перемешивали, отбирали навеску 1 г в стеклянную пробирку. Заливали 1 мл очищенной воды, встряхивали на Вортексе при 2000 об/мин в течение 3 с. Экстрагировали с использованием встряхивателя VXRbasicVibrax в течение 10 мин. Водный слой (0,5 мл) отбирали дозатором в стеклянную центрифужную пробирку, добавляли 50 мкл раствора тимола в бутилацетате в концентрации 41,6 нг/мкл. Встряхивали на Вортексе в течение 3 с. Экстрагировали 250 мкл бутилацетата с использованием встряхивателя VXRbasicVibrax в течение 10 мин при 1000 об/мин. Центрифугировали при 3500 об/мин 10 мин. Верхний слой органического растворителя в количестве 100 мкл отбирали дозатором и переносили в виалу для автосамплера. Добавляли 100 мкл BSTFA+1% TMCS. Виалу закрывали, термостатировали 30 мин при температуре 80 °C. После охлаждения пробу анализировали методом хромато-масс-спектрометрии.

Идентификацию ГОМК проводили в виде 2TMS-4-оксибутановой кислоты по времени удерживания и соответствию библиотечному масс-спектру. Масс-спектр 2ТМС-4-оксибутановой кислоты: 147 999; 73 544; 75 249; 117 235; 233 179; 148 162; 45 138; 14 989; 4178; 14 370. Масс-спектр ТМС-тимола: 207 999; 73 852; 222 265; 208 196; 45 156; 91 100; 7587; 7481; 4078; 9667. Масс-спектры 2ТМС-4-оксибутановой кислоты и ТМС-тимола имеются в библиотеках NIST, Willey. Время удерживания 2TMS-4-оксибутановой кислоты 17,050. Время удерживания ТМС- тимола 23,438.

Определенные сложности при идентификации ГОМК в моче представляет эндогенное вещество — мочевина. Мочевина экстрагируется из мочи в процессе ЖЖЭ и образует 2ТМС-мочевину при проведении дериватизации проб. Масс-спектр 2ТМС-мочевины: 147 999; 186 630; 73 300; 74 180; 148 170; 75 150; 190 120; 146 110; 4590; 6690. У 2ТМС-мочевины и 2ТМС-4-оксибутановой кислоты одинаковый характеристический ион — m/z 147. В случае неразделения пиков 2ТМС-мочевины и 2-ТМС-4-оксибутановой кислоты при хроматографической разгонке одинаковый характеристический ион будет искажать результат количественного определения 4-оксибутановой кислоты. На рисунке Хроматограмма определения 4-оксибутановой кислоты в пробе мочи в присутствии мочевины с помощью ГХ-МС. представлена хроматограмма определения 4-оксибутановой кислоты в пробе мочи в присутствии мочевины методом ГХ-МС. Время удерживания 2ТМС-мочевины 17,719 мин и 2ТМС-оксибутановой кислоты 17,050 мин. В предложенных условиях хроматографирования мочевина не влияет на идентификацию и количественное определение 4-оксибутановой кислоты.

Для количественного определения (путь построения градуировочных графиков) использовали кровь, мочу, печень, заведомо не содержащие ГОМК (контроль проводился методом газовой хроматографии с масс-селективным детектором). К пробам крови, мочи и печени добавляли раствор оксибутирата в воде. Диапазон концентраций 26,4—1321,6 мг/л. Пробоподготовку проводили, как описано ранее для крови, мочи и внутренних органов. Градуировочный график строили по 7 точкам, соответствующим концентрации оксибутирата в крови, моче и внутренних органах: 26,4; 66,3; 132,16; 264,32; 330,4; 660,8 и 1321,6 мг/л. При расчетах концентраций для построения градуировочного графика использовали коэффициент пересчета натрия оксибутирата в 4-оксибутановую кислоту (0,826). Содержание оксибутирата в биологических объектах определяли методом внутреннего стандарта. Внутренний стандарт — раствор тимола в бутилацетате в концентрации 41,6 нг/мкл.

Метрологические характеристики. Предел обнаружения ГОМК в крови, моче и внутренних органах 10 мг/л, предел количественного определения 26 мг/л. Коэффициент корреляции графиков более 0,999. Среднее квадратичное отклонение 13,1. Относительное стандартное отклонение 4,4% (для концентрации ГОМК 330,4 мг/л).

Заключение

1. Определение ГОМК в биологических объектах — актуальная задача современной аналитической токсикологии.

2. Предложенная методика количественного определения ГОМК основана на методе хромато-масс-спектрометрии, являющемся в настоящее время основным методом идентификации токсикантов при производстве судебно-химических исследований; она предназначена для широкого круга лабораторий.

3. Методика пробоподготовки биологических объектов позволяет проводить скрининговые анализы биопроб в достаточно большом объеме, а малые объемы используемых реактивов снижают материальные затраты на производство исследований.

4. В связи с быстрым выведением ГОМК из крови для установления факта употребления натрия оксибутирата необходимо анализировать несколько биологических объектов (моча живых лиц, биоткани при смертельных исходах), особенно в случаях длительного (несколько часов) интервала между предполагаемым приемом вещества и временем отбора проб.

5. Судебно-химические (химико-токсикологические) исследования для определения ГОМК необходимо проводить с количественной оценкой содержания ГОМК в биоматериале.

6. Определение ГОМК в биологических объектах может свидетельствовать о приеме не только натрия оксибутирата, но и γ-бутиролактона и 1,4-бутандиола.

7. При интерпретации результатов судебно-химических (химико-токсикологических) исследований следует учитывать эндогенные концентрации ГОМК в прижизненных и посмертных объектах.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Источник